[發(fā)明專利]一種動(dòng)物血漿中氫溴酸檳榔堿含量的測(cè)定方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310023215.0
• 申請(qǐng)日: 2013-01-23
• 公開（公告）號(hào): CN103940935A
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李冰;張繼瑜;周緒正;牛建榮;魏小娟;李金善;李劍勇;楊亞軍;劉希望
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所
• 主分類號(hào): G01N30/88
• 分類號(hào): G01N30/88
• 代理公司: 蘭州中科華西專利代理有限公司 62002
• 代理人: 馬正良

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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于藥物分析領(lǐng)域，涉及一種定量測(cè)定動(dòng)物血漿中氫溴酸檳榔堿含量的方法。

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背景技術(shù)

[0002]?檳榔堿是中藥檳榔中的活性成分之一，在獸醫(yī)臨床上主要用于治療絳蟲、牛前胃遲緩，以及馬屬動(dòng)物胃擴(kuò)張、大腸阻塞、腸麻痹等畜禽病。另外，利用檳榔堿的滅釘螺協(xié)同作用，可顯著降低化學(xué)滅螺藥的投藥量，與此減少了對(duì)環(huán)境造成的污染。由于檳榔堿應(yīng)用于動(dòng)物具有明顯的副作用，在重要的經(jīng)濟(jì)動(dòng)物及寵物上的使用受到了限制。檳榔堿其氫溴酸鹽有良好的促進(jìn)胃腸運(yùn)動(dòng)作用和驅(qū)蟲作用，氫溴酸檳榔堿對(duì)多種寄生蟲有驅(qū)除作用，可以代替目前臨床上常用的傳統(tǒng)產(chǎn)品，尤其對(duì)犬絳蟲驅(qū)蟲效果能達(dá)到100%，臨床效果顯著，有廣闊的推廣應(yīng)用前景，屬高效、安全、污染少、殘留小、價(jià)廉、使用方便的農(nóng)業(yè)投入品，有利于解決當(dāng)前畜牧養(yǎng)殖業(yè)中寄生蟲病的防治問(wèn)題。由于氫溴酸檳榔堿紫外最大吸收波長(zhǎng)215nm，屬于末端吸收，紫外吸收很弱，高效陽(yáng)離子交換色譜法和高效液相色譜-紫外檢測(cè)法靈敏度不高，且目前無(wú)動(dòng)物血漿中氫溴酸檳榔堿檢測(cè)方法的報(bào)道。為了解決動(dòng)物血漿中氫溴酸檳榔堿含量測(cè)定問(wèn)題，需在分析檢測(cè)技術(shù)中尋求突破，以提高檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確性。

HPLC—MS/MS（液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜）聯(lián)用技術(shù)是當(dāng)前比較新穎的技術(shù)，因其結(jié)合了液相色譜的高效分離能力和質(zhì)譜的準(zhǔn)確定性能力，近年來(lái)成為最可靠實(shí)用的分析手段。該分析技術(shù)需樣量少、檢測(cè)限低，尤其適用于藥物在機(jī)體代謝等因素的作用下所產(chǎn)生的分解物或代謝物的結(jié)構(gòu)研究和量的變化。

發(fā)明內(nèi)容

鑒于上述，本發(fā)明的目的在于提供一種檢測(cè)動(dòng)物血漿中氫溴酸檳榔堿含量的測(cè)定方法。該方法將高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)應(yīng)用于動(dòng)物血漿中氫溴酸檳榔堿的含量測(cè)定，以β-蒎烯為內(nèi)標(biāo)，能準(zhǔn)確測(cè)定動(dòng)物血漿中氫溴酸檳榔堿的含量。

本發(fā)明的目的通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)：

一種動(dòng)物血漿中氫溴酸檳榔堿含量的測(cè)定方法，其步驟是：

a、取空腹動(dòng)物靜脈空白血漿，加入氫溴酸檳榔堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液、內(nèi)標(biāo)溶液，渦旋混合，加0.1M的AgNO₃,?渦旋30-40s，加入NaCl，渦旋2-3min，加石油醚，渦旋2-3min，離心30-40min，分離有機(jī)層置于另一離心管中，40℃水浴中氮?dú)獯蹈桑映兯芙鈿堅(jiān)脴?biāo)準(zhǔn)血漿溶液，過(guò)0.45μm或0.22μm微孔濾膜，得標(biāo)準(zhǔn)血漿溶液，待測(cè)；

b、取口服給藥后的動(dòng)物血漿，加入內(nèi)標(biāo)溶液，渦旋混合，加0.1M的AgNO₃,?渦旋30-40s，加入NaCl，渦旋2-2.5min，加石油醚，渦旋2-2.5min，離心30-40min，分離有機(jī)層置于另一離心管中，40-50℃水浴中氮?dú)獯蹈桑映兯芙鈿堅(jiān)^(guò)0.45μm或0.22μm微孔濾膜，得供試品溶液，待測(cè)；

c、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用分別測(cè)定a、b步驟得到的標(biāo)準(zhǔn)血漿溶液和供試品溶液，測(cè)定的條件是用碳十八烷基鍵合硅膠固定相色譜柱，流動(dòng)相乙腈與pH為4的甲酸銨水溶液比值為8∶92；流速0.4mL·min^-1；電噴霧ESI源；噴霧電壓Is為4kv；霧化溫度：350℃；霧化氣流量：l1?L/min；碰撞氣流量：10?L·min^-1；毛細(xì)管出口端電壓：50v；碰撞能量：20v；deta?EMV+：180v；檢測(cè)方式為正離子多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)，用于定量分析的檳榔堿母／子離子對(duì)為m/z?156.2—?53.0；?

d．將a、b步驟得到的標(biāo)準(zhǔn)血漿溶液和供試品溶液，分別注入高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行檢測(cè)，得到總離子流圖和質(zhì)譜圖，測(cè)定峰面積，以檳榔堿和內(nèi)標(biāo)的峰面積比（Y）對(duì)血漿中檳榔堿濃度（X）進(jìn)行線性回歸，得線性關(guān)系和回歸方程，計(jì)算待測(cè)物濃度。

上述氫溴酸檳榔堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液、內(nèi)標(biāo)溶液分別為精密稱取氫溴酸檳榔堿標(biāo)準(zhǔn)品適量，用水溶解并定容得到氫溴酸檳榔堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液；精密稱取β-蒎烯適量，用無(wú)水乙醇溶解并定容得到內(nèi)標(biāo)溶液。

上述所述動(dòng)物可為犬等肉食獸和禽類等。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：

1、本發(fā)明樣品處理方法簡(jiǎn)便易操作，方法回收率在95%左右，RSD(%)小于3%，滿足分析檢測(cè)要求。