[發(fā)明專利]試管芋脫毒快速繁殖的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310023036.7
• 申請(qǐng)日: 2013-01-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103070071A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-05-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉玉平;柯衛(wèi)東;彭靜;黃新芳;劉義滿;李峰;葉元英;朱紅蓮;李雙梅;黃來(lái)春
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 武漢市蔬菜科學(xué)研究所
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 武漢開(kāi)元知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 42104
• 代理人: 馬輝

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)育種領(lǐng)域，具體地指一種試管芋脫毒快速繁殖的方法。

背景技術(shù)

芋是中國(guó)古老的作物之一，原產(chǎn)我國(guó)及印度馬來(lái)半島的熱帶沼澤地帶。芋的球莖富含淀粉，是南太平洋許多國(guó)家的主要食物來(lái)源，在斐濟(jì)、湯加、庫(kù)克群島等國(guó)家，芋不僅是基本食物，還是其外匯收入的穩(wěn)定渠道。芋在我國(guó)栽培歷史悠久，分布極廣，南方地區(qū)以魁芋為主多種類型并存，長(zhǎng)江流域以多子芋為主。芋既可鮮食，又可進(jìn)行深加工。加工的產(chǎn)品出口日本、韓國(guó)及東南亞國(guó)家。2003年全世界芋的總出口量為12.03億噸，主要出口國(guó)是中國(guó)，年出口量為11.45億噸，占世界出口總量的95.18%。芋作為我國(guó)主要的土特產(chǎn)品，進(jìn)一步發(fā)展其生產(chǎn)和出口業(yè)具有廣闊的前景。

芋長(zhǎng)期利用球莖進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)繁殖，已普遍受到芋花葉病毒的侵染。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，我國(guó)芋的種植面積約為200～300萬(wàn)畝，有70%左右的芋被芋花葉病毒感染，感染病毒的芋產(chǎn)量會(huì)下降30%~70%。另外，常規(guī)芋用種量大，每畝需用種100～150kg，繁殖系數(shù)低，一般為1：20，一年繁殖一代。這些問(wèn)題不利于芋新品種的推廣，嚴(yán)重制約了芋的生產(chǎn)、出口及國(guó)際間種質(zhì)資源的交流。

進(jìn)行脫毒試管芋誘導(dǎo)技術(shù)研究，是目前解決該問(wèn)題的最好途徑。20世紀(jì)70年代未，日本、美國(guó)、哥斯達(dá)黎加、菲律賓等國(guó)的科學(xué)家先后研究了芋花葉病毒對(duì)芋產(chǎn)量的影響，并采用莖尖離體培養(yǎng)、種子營(yíng)救培養(yǎng)以及莖尖離體培養(yǎng)和熱療法相結(jié)合來(lái)生產(chǎn)芋脫毒苗。我國(guó)90年代初，也先后獲得了脫毒試管苗。但是，這些芋脫毒苗或試管苗移栽成活率低，栽培技術(shù)要求高，不能直接應(yīng)用于實(shí)際生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對(duì)無(wú)性繁殖的荸薺的種球帶病和種性退化問(wèn)題，提供一種試管芋脫毒快速繁殖的方法，提高荸薺的品質(zhì)。

本發(fā)明試管芋脫毒快速繁殖的方法，包括以下步驟：

1）叢芽分化：選取健康芋的頂芽或腋芽為外植體，剝?nèi)ネ鈱喻[片，接種于芋叢芽分化培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，所述叢芽分化培養(yǎng)基為3/4MS培養(yǎng)基、添加6-芐氨基嘌呤（6-BA）0.5～3.0mg/L、萘乙酸（NAA）0.5～1.0mg/L、蔗糖30g/L和瓊脂5～6g/L，pH值為5.8～6.0，培養(yǎng)溫度為26～28℃，光照強(qiáng)度為1500～2000?lx，每天光照8～10h，直至生長(zhǎng)成單芽或叢芽；

2）莖尖分生組織培養(yǎng)脫毒：從步驟1）中誘導(dǎo)的單芽或叢芽上切取0.3～0.5mm的莖尖分生組織接種于莖尖分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)，所述莖尖分化培養(yǎng)基為3/4MS培養(yǎng)基、添加6-芐氨基嘌呤（6-BA）0.5～2.0mg/L、萘乙酸（NAA）0.1～0.5mg/L、蔗糖30g/L和瓊脂5～6g/L，pH值為5.8～6.0，培養(yǎng)溫度26～28℃，光照強(qiáng)度為1500～2000?lx，每天光照8～10h，直至生長(zhǎng)出單芽或叢芽；

3）芋花葉病毒檢測(cè)：對(duì)芋莖尖分生組織分化的單芽或叢芽進(jìn)行芋花葉病毒的檢測(cè)，反應(yīng)值與陰性值較接近的為陰性，反應(yīng)值高于陰性值兩倍的為陽(yáng)性；

4）繼代增殖：將陰性反應(yīng)的單芽或叢芽轉(zhuǎn)接到繼代增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代增殖培養(yǎng)，所述繼代增殖培養(yǎng)基為3/4MS培養(yǎng)基、添加6-芐氨基嘌呤（6-BA）0.5～5.0mg/L、萘乙酸（NAA）0.5～2.0mg/L、活性炭（AC）3.0～5.0g/L、蔗糖30g/L和瓊脂5～6g/L，pH值為5.8～6.0，培養(yǎng)溫度26～28℃，光照強(qiáng)度為1500～2000?lx，每天光照8～10h，直至生長(zhǎng)出新的叢芽；

5）生根：將脫毒芋的叢芽分割成單芽，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根，所述生根培養(yǎng)基為2/3MS培養(yǎng)基、添加6-芐氨基嘌呤（6-BA）0.5～1.0mg/L、萘乙酸（NAA）0.1～0.5mg/L、活性炭（AC）3.0～10.0g/L、蔗糖30～50g/L和瓊脂5～6g/L，pH值為5.8～6.0，培養(yǎng)溫度26～28℃，光照強(qiáng)度為1500～2000?lx，每天光照8～10h，直至生根形成試管苗；

6）誘導(dǎo)試管芋：生根培養(yǎng)后，將試管苗接于試管芋誘導(dǎo)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，所述試管芋誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基、添加6-芐氨基嘌呤（6-BA）0.5～1.0mg/L、活性炭（AC）3.0～10.0g/L、蔗糖30～100g/L和瓊脂5～6g/L，pH值為5.8～6.0，培養(yǎng)溫度為26～28℃，光照強(qiáng)度為1500～2000?lx，每天光照8～10h，20~30天后即可形成脫毒試管芋。