[發(fā)明專(zhuān)利]一種游離酶與固定化酶聯(lián)合水解制備蠶蛹肽的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310022919.6
• 申請(qǐng)日: 2013-01-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103103243A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-05-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 方佳茂;孫中濤;陳偉濱
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 廣東環(huán)西生物科技股份有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12P21/06
• 分類(lèi)號(hào): C12P21/06
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44205
• 代理人: 譚英強(qiáng)

1.一種游離酶與固定化酶聯(lián)合水解制備蠶蛹肽的方法，包括如下步驟：

（1）將脫脂蠶蛹配成料液，將料液中的蛋白變性，然后加入堿性蛋白酶酶解，濾去殘?jiān)玫匠吻迕附庖孩瘢?/p>

（2）將酶解液Ⅰ轉(zhuǎn)入固定化酶反應(yīng)器中，加入固定化蛋白酶進(jìn)行酶解，得到酶解液Ⅱ；

（3）酶解液Ⅱ進(jìn)一步過(guò)濾、干燥，得到蠶蛹肽粉。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（1）的具體操作為：將脫脂蠶蛹粉配成8～10%?(w/w)的料液，85～90℃加熱8～12min，使蛋白變性，冷卻后，加入堿性蛋白酶酶解，濾除殘?jiān)玫匠吻宓拿附庖骸?/p>

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述堿性蛋白酶的用量為1600～2400u/g脫脂蠶蛹，酶解條件為pH8.0～8.5，50～55℃酶解1.5～2.0h。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）所述固定化蛋白酶為固定化的中性蛋白酶或/和風(fēng)味蛋白酶。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）所述固定化蛋白酶為固定化的中性蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶，中性蛋白酶的用量為2000～3000u/g脫脂蠶蛹，風(fēng)味蛋白酶的用量為4.0～6.0LAPU/g脫脂蠶蛹，酶解條件為45～55℃酶解3～5h。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述固定化蛋白酶中，中性蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶的比例為400～600?u：1?LAPU。

7.根據(jù)權(quán)利要求1、4～6任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，固定化蛋白酶的制備方法如下：將蛋白酶以10～15%(w/w)的濃度溶于水中，濾去殘?jiān)偌尤?0～15%（v/v）的保護(hù)劑，然后與5～7%(w/w)海藻酸鈉溶液等體積混均，再逐滴滴入2.5～3.5%(w/w)的氯化鈣溶液中，凝結(jié)成微球；或者將不同的蛋白酶分別固定化后，再混合使用。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述保護(hù)劑為甘露醇。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（3）所述過(guò)濾的具體操作為：酶解液Ⅱ經(jīng)精濾除去渾濁物，采用截?cái)喾肿恿繛?000Da的超濾膜進(jìn)行超濾，透過(guò)液濃縮干燥，獲得分子量2000Da以內(nèi)的蠶蛹肽粉。