[發明專利]一種可提高豬胚胎體外發育效率的豬胚胎培養液及其制備方法

無效

• 申請號: 201310022684.0
• 申請日: 2013-01-22
• 公開（公告）號: CN103074294A
• 公開（公告）日: 2013-05-01
• 發明（設計）人: 張運海;李運生;隨劉才;章孝榮;方富貴;楊陽;劉亞;曹祖兵
• 申請（專利權）人: 安徽農業大學
• 主分類號: C12N5/073
• 分類號: C12N5/073
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

［技術領域］

本發明涉及動物胚胎體外培養液，尤其涉及一種可提高豬胚胎體外發育效率的豬胚胎培養液及其制備方法。

［背景技術］

　　豬的內臟器官大小，生理構造和人的最為接近，隨著科學技術的發展，轉基因打靶技術的成熟，能夠有效的消除物種間的免疫排斥反應（Lai,?L.,?Kolber-SimondsｂProduction?of?a-1,3-galactosyltransferase?knockout?pigs?by?nuclear?transfer?cloning.?Science　295,?1089–1092），該動物是人工器官移植的最佳供體因此豬已經成為各實驗室的主要動物模型，豬體外胚胎的生產和培養體系也日益完善。

體外培養主要包括豬的卵母細胞成熟和胚胎的培養體系。為了確保實驗的效果，實驗中所使用的培養液的成分和培養的環境（包括溫度，氣體濃度和濕度），都是盡量模擬母畜生殖道的內環境。

但是由于畢竟是模擬的，所以豬的體外培養體系仍不能完全模仿母畜生殖道的內環境，因此體外胚的培養效果與體內胚的發育效果仍然有一定的差距。母畜生殖道內的液體成分較為復雜，含有大量的激素和生長因子，且這些成分并非恒定，或多或少對豬的胚胎的后期發育有積極地調控作用，而實驗室常用的培養液成分相對單一，固定，無法完全模擬母畜生殖道內的液體成分，這也解釋了為什么動物的克隆效率比較低。因此實驗室內常用的培養液還需通過添加或者調節生長因子，激素等，使其能最佳模擬自然母畜的生殖道內液體，從而使豬胚胎的體外培養體系進一步完善，在實驗室內能夠得到足夠多的優質胚胎，為該動物的后期實驗研究提供好的素材。

據研究，肌醇是一種低分子有機物，最初在肌肉中發現，后來已在微生物、動物中廣泛發現。幾乎所有生物都含有游離態或結合態的肌醇。具有類似微生物B1和生物素的作用，是人和動物正常生理功能的調節中不能缺少的。

有研究表明，在兔自然胚胎的發育過程中，發現隨著胚胎的發育，對肌醇的攝取量呈線性上升，胚胎卵裂時對肌醇的運輸是通過肌醇鈉運輸蛋白來實現的（Warner,?S.?M.,?F.?V.?Conlon,?Inositol?transport?in?preimplantation?rabbit?embryos:?effects?of?embryo?stage,?sodium,?osmolality?and?metabolic?inhibitors.?Reproduction?125:?479-493）。肌醇可促進兔子孤雌胚的卵裂率和囊胚發育率顯著提高（Mitalipov,?S.M.,?K.?L.?White,?Development?of?nuclear?transfer?and?parthenogenetic?rabbit?embryos?activated?with?inositol?1,4,5-trisphosphate.Biol?Reprod?60:?821-82）。電激活（激活液里含有肌醇和鈣離子）后，用6-DMAP處理三小時的激活步驟處理兔子的核移植胚胎時，也得到了較高的囊胚率，且胚胎的總細胞計數多，胚胎凋亡少（Liu,?S.?Z.,?M.?X.?Jiang,?Parthenogenetic?and?nuclear?transfer?rabbit?embryo?development?and?apoptosis?after?activation?treatments.?Mol?Reprod?Dev?72:?48-53）。肌醇能夠促進胚胎的后續發育，原因可能是激活時候肌醇能夠使重構胚的內源性鈣離子反復震蕩，這與其自然受精胚胎的激活原理相似，而添加高濃度的鈣離子只能使重構胚的內源性鈣離子濃度升高，激活效果下降，繼而影響胚胎的著床和后期發育（Inoue,?K,?N.Ogonuki,Improved?postimplantation?development　of?rabbit?nuclear?transfer?embryos?by?activation?with?inositol?1,4,5-trisphosphate.?Cloning?Stem?Cells?4:?311-317）。在牛上，肌醇也表現出可以改善牛胚胎體外發育能力（Lim,?K.?T.,?G.?Jang　Improved?in?vitro?bovine?embryo?development?and?increased?efficiency?in?producing?viable?calves?using?defined?media　Theriogenology?67:?293-302）。由于肌醇成分簡單明確，無生物學危害，說明肌醇也許可以作為豬胚胎培養液的一種添加物。