[發(fā)明專利]一種絲素軟骨復(fù)合體義耳及其制備方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310021352.0
• 申請(qǐng)日: 2013-01-18
• 公開（公告）號(hào): CN103933613A
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 倪玉蘇;江毅;文建川;陳新;邵正中;于慧前;孫珊;李雯;李華偉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 復(fù)旦大學(xué)附屬眼耳鼻喉科醫(yī)院
• 主分類號(hào): A61L27/38
• 分類號(hào): A61L27/38;A61L27/22
• 代理公司: 上海元一成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

1.一種絲素軟骨復(fù)合體義耳，其特征在于，采用絲素復(fù)合物作支撐材料，以軟骨細(xì)胞作為外層，制成絲素軟骨復(fù)合體義耳，所述的絲素蛋白重量/體積濃度為6-20％。

2.按權(quán)利要求1所述的絲素軟骨復(fù)合體義耳，其特征在于，所述的絲素蛋白重量/體積濃度為6-12％。

3.按權(quán)利要求1所述的絲素軟骨復(fù)合體義耳，其特征在于，所述的絲素蛋白重量/體積濃度為10％。

4.按權(quán)利要求1所述的絲素軟骨復(fù)合體義耳，其特征在于，所述的絲素軟骨復(fù)合體義耳是正常耳廓結(jié)構(gòu)。

5.權(quán)利要求1所述的絲素軟骨復(fù)合體義耳的制備方法，其特征在于，其包括步驟：

1)制備絲素蛋白

采用廢桑蠶生絲在NaHCO3水溶液中脫膠，將脫膠絲溶于LiBr水溶液中，溶解，過濾，除去雜質(zhì)，得絲素蛋白鹽溶液，用去離子水透析除去溶液中的LiBr，得絲蛋白，再濃縮，PEG透析，絲素蛋白溶液離心去除雜質(zhì)，留上清液，得重量/體積濃度為6-20％的絲素蛋白；

2)制備絲素蛋白支架

用制得的絲素蛋白溶液與正丁醇混合，攪拌后，放入-20℃冰箱24小時(shí)，室溫條件下，制得絲素蛋白多孔支架；去離子水清洗去除殘存正丁醇，制得不同孔徑尺寸的多孔絲素蛋白多孔支架；

3)軟骨細(xì)胞分離和細(xì)胞培養(yǎng)

采用獲得的無菌成年雄性SD大鼠關(guān)節(jié)軟骨，先后采用胰蛋白酶EDTA消化(GIBCO，0.25％trypsin)，用II型膠原酶消化后，過濾，離心，重懸細(xì)胞，最后接種于懸浮瓶中培養(yǎng)，隔天換液；

4)軟骨細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)染

傳代軟骨細(xì)胞進(jìn)行慢病毒轉(zhuǎn)染；

5)絲素蛋白膜和軟骨細(xì)胞體外培養(yǎng)

轉(zhuǎn)染后，軟骨細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)和傳代，然后種植在多孔絲素蛋白上，將絲素蛋白膜與軟骨細(xì)胞體外培養(yǎng)4周；制得絲素軟骨復(fù)合體義耳材料。

6.按權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所屬步驟1)的NaHCO3為0.5wt％；所述LiBr水溶液為9.3mol/L。

7.按權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所屬步驟2)的絲素蛋白溶液與正丁醇以1∶1混合。

8.按權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所屬步驟3)的懸浮瓶中培養(yǎng)成分含有高糖DMEM+15％胎牛血清。

9.權(quán)利要求1所述的絲素軟骨復(fù)合體義耳在制備小耳畸形的耳廓再造材料中的應(yīng)用。