[發明專利]一種重組尿酸氧化酶的高效分泌表達及純化方法

無效

• 申請號: 201310021023.6
• 申請日: 2013-01-21
• 公開（公告）號: CN103173471A
• 公開（公告）日: 2013-06-26
• 發明（設計）人: 張軍;張博學;李慶春;杜研;鞠蒙蒙
• 申請（專利權）人: 吉林修正藥業新藥開發有限公司
• 主分類號: C12N15/53
• 分類號: C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;C12N9/06;C12R1/19
• 代理公司: 吉林省長春市新時代專利商標代理有限公司 22204
• 代理人: 孫國振

1.一種表達重組尿酸氧化酶的大腸桿菌操縱子，其結構包括：大腸桿菌堿性磷酸酶啟動子（SEQ1）、經過優化改造的LamB信號肽的編碼序列（SEQ2）、人工合成的重組尿酸氧化酶的編碼序列（SEQ3）。

2.含有權利要求1所述的大腸桿菌操縱子的大腸桿菌質粒pPLS-UOX，其特征在于，通過將權利要求1所述的操縱子克隆至大腸桿菌質粒載體pBR322中而獲得。

3.一種高效分泌表達重組尿酸氧化酶的工程菌PLS-UOX，其特征在于，是用權利要求3所述的表達質粒轉化的W3110大腸桿菌空宿主。

4.一種重組尿酸氧化酶分離純化提取方法，其步驟包括：收集菌體經高壓均質破碎；破菌液離心，收集離心上清液；蛋白上清液經過陽離子層析、疏水層析、陰離子層析，最終得到高純度的重組尿酸氧化酶蛋白。

5.根據權利要求4所述的重組尿酸氧化酶分離純化提取方法，其特征在于菌體經高壓均質破碎壓力在30-40MPa，破菌液使用離心機離心力不低于8000g。

6.根據權利要求4所述的重組尿酸氧化酶蛋白層析分離純化提取方法，其特征在于：采用陽離子層析處理蛋白離心上清液，層析柱出口端液體pH及Cond值與平衡液一致，調節離心上清液的Cond值低于平衡液Cond值即進行上樣，上樣后使用洗脫液進行洗脫，并收集目標峰蛋白。

7.根據權利要求4所述的重組尿酸氧化酶蛋白層析分離純化提取方法，其特征在于：采用疏水層析陽離子層析純化液，層析柱出口端液體pH及Cond值與平衡液一致即進行上樣，上樣后使用洗脫液進行洗脫，并收集目標峰蛋白。

8.根據權利要求4所述的重組尿酸氧化酶蛋白層析分離純化提取方法，其特征在于：采用陰離子層析處理疏水層析純化液，層析柱出口端液體pH及Cond值與平衡液一致，調節上樣樣品的Cond值低于平衡液Cond值即進行上樣，上樣后使用洗脫液進行洗脫，并收集目標峰蛋白。