[發(fā)明專利]一種篩選抗藍耳病豬的CYP3A88分子標記育種方法及其應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310019592.7
• 申請日: 2013-01-18
• 公開（公告）號: CN103131772A
• 公開（公告）日: 2013-06-05
• 發(fā)明（設計）人: 姜運良;蔣成蘭;李艷平;王鵬飛;康麗;姜偉;王力圓
• 申請（專利權(quán)）人: 山東農(nóng)業(yè)大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子遺傳學領(lǐng)域，具體涉及了一種篩選抗藍耳病豬的育種方法，通過判斷豬CYP3A88基因5′調(diào)控區(qū)突變位點的多態(tài)性來進行選種，并人為地應用該突變位點實現(xiàn)抗藍耳病豬的育種。?

背景技術(shù)

豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine?reproductive?and?respiratory?syndrome，PRRS）又稱藍耳病，是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）感染豬肺巨噬細胞所致的豬繁殖與呼吸系統(tǒng)疾病，是危害世界養(yǎng)豬業(yè)的首要傳染病（Neumann?et?al.2005）。該病主要引起妊娠母豬發(fā)熱、早產(chǎn)、木乃伊胎和弱仔等繁殖障礙以及各年齡段豬的呼吸道癥狀和高死亡率（Rossow1998）。豬的抗病性狀屬于中等遺傳力水平的閾性狀，由病毒引起的呼吸道疾病的抗性是可以遺傳的。越來越多的證據(jù)也表明豬對PRRSV的抗性存在遺傳差異（Ait-Ali?et?al.,2007,Ait-Ali?et?al,2011;Bates?et?al.,2008;Petry?et?al.,2005,2007;Vincent?et?al.,2005;Vincent?et?al.,2006）。Petry等(2005)比較了內(nèi)布拉斯加指數(shù)系和漢普夏-杜洛克雜交豬對PRRSV感染后反應的差異，檢測了這兩種豬的體重的變化，直腸溫度和病毒滴度等指標，結(jié)果表明內(nèi)布拉斯加指數(shù)系具有較強的抗性；Petry等（2007)又發(fā)現(xiàn)在這兩種豬中，肺臟和淋巴結(jié)組織中特異的免疫功能基因和細胞因子的表達水平存在差異；Bates等(2008)利用基因芯片技術(shù)在這兩種豬肺臟和淋巴結(jié)中篩選差異表達的基因，結(jié)果發(fā)現(xiàn)大量基因表達存在差異。Vincen等(2006)利用流式細胞儀測定外周血單核巨噬細胞對PRRSV感染率的差異，將豬群分為高易感和低易感2個系，于6周齡接種病毒，發(fā)現(xiàn)高易感系在接種21d后臨床癥狀更嚴重，且高易感系血清病毒滴度比低易感系高。Reiner等（2010）比較了德國地方品種小型豬和皮特蘭豬感染PRRSV后的臨床狀態(tài)，病毒量和血清抗體轉(zhuǎn)換情況，發(fā)現(xiàn)皮特豬在感染后6d，病毒量達到最高，感染率為100%，小型豬在感染12d后病毒量達到高峰，感染率為87%，皮特蘭豬病毒復制量比小型豬高，小型豬產(chǎn)生更有效的抗體，結(jié)果表明這兩種豬對PRRSV的反應存在遺傳差異。?

從藍耳病的流行病學調(diào)查可以看出，易感豬多數(shù)為西方瘦肉型豬而我國的地方豬種染病的較少。即使在以我國地方豬種為親本的配套系中感染PRRSV的情況也較輕。大蒲蓮豬是山東省體型較大的華北型黑豬，具有抗病耐粗、多胎高產(chǎn)、哺育能力強、肉質(zhì)好等優(yōu)良特性。調(diào)查顯示，自2006年以來，在大批西方瘦肉型豬感染藍耳病死亡的情況下，大蒲蓮豬及大蒲蓮豬為母本的二元雜交豬均表現(xiàn)出對PRRSV超強的抗病能力。因此如何利用該特性研究對PRRSV超強的抗病能力，成為本領(lǐng)域急需解決的問題。?

發(fā)明內(nèi)容

基于上述的原因，本發(fā)明通過篩選出豬抗藍耳病相關(guān)的基因標記，建立豬分子標記輔助育種方法，為豬抗藍耳病品種培育提供基因標記和技術(shù)方法。根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)，發(fā)明人通過進一步的實驗發(fā)現(xiàn)豬CYP3A885′調(diào)控區(qū)－78位點的A到T突變在體外試驗中改變了CYP3A88啟動子的活性，兩者差異顯著，可見檢測與突變相關(guān)聯(lián)的分子標記不僅方法簡便快速，而且?不受環(huán)境影響，并可實現(xiàn)早期選種。?

細胞色素P450酶系(cytochrome?P450,CYP)是一組含亞鐵血紅素的酶，參與了許多內(nèi)源性物質(zhì)如類固醇、脂肪酸、膽酸、維生素D3,前列腺素、兒茶芬胺和許多進入體內(nèi)的外源性物質(zhì)如藥物、殺蟲劑、毒物和致癌物的代謝（Gueguen?et?al.2006;Nebert?et?al.2002）。目前已知的豬CYP3A亞家族蛋白共有4種亞型:CYP3A22、CYP3A29、CYP3A39和CYP3A88；其中，CYP3A29是研究得最多的亞型，研究表明其具有典型的硝苯地平氧化活性(人體內(nèi)CYP3A4和3A5的特異活性)，且能被苯巴比妥，利福平和地塞米松誘導，而CYP3A22、CYP3A39和CYP3A88的研究資料則相對缺乏。?