[發(fā)明專利]一種基于γ-Fe2O3的NMR納米探針食源性致病菌的快速檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310019014.3
• 申請(qǐng)日: 2013-01-19
• 公開（公告）號(hào): CN103364428A
• 公開（公告）日: 2013-10-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張錦勝;唐群;賴衛(wèi)華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南昌大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N24/08
• 分類號(hào): G01N24/08;G01N33/577
• 代理公司: 南昌洪達(dá)專利事務(wù)所 36111
• 代理人: 劉凌峰

1.一種基于γ-Fe₂O₃的NMR納米探針食源性致病菌的快速檢測(cè)方法，?其特征步驟如下：

1）檢測(cè)目標(biāo)菌的特異性免疫磁珠的制備；

2）將目標(biāo)菌特異性單克隆抗體在固相載體上的固定；

3）免疫磁珠富集目標(biāo)菌株，并分離：將第1步制得的免疫磁珠加入待檢樣品，充分混合震蕩，抓取目標(biāo)菌后通過(guò)施加外加磁場(chǎng)，則磁珠就匯集到磁場(chǎng)一邊，吸走上清液則可以分離出磁珠，若待檢樣本中有目標(biāo)菌，則被磁珠所富集，加少量無(wú)菌的去離子水則形成目標(biāo)菌的磁珠懸濁液；

4）將富集的磁珠懸濁液加到固定了單克隆抗體的固相載體上，若存在目標(biāo)菌則形成雙抗夾心，用無(wú)菌的去離子水清洗，則沒(méi)有抓取到目標(biāo)菌的磁珠就被洗掉，若不存在目標(biāo)菌，則所有磁珠都被洗掉；

5）之后，用洗脫劑將固定板上的雙抗夾心的磁珠洗下來(lái)，用外加磁場(chǎng)分離磁珠的方法用無(wú)菌的去離子水清洗掉離子和溶劑，如果還存在磁珠就是抓到目標(biāo)菌的磁珠；

6）這部分磁珠，加入無(wú)菌的去離子水形成磁珠的懸濁液，進(jìn)行核磁共振的弛豫時(shí)間測(cè)定，在固定場(chǎng)強(qiáng)下，無(wú)菌的去離子水的T1/T2是一個(gè)恒定值，以無(wú)菌的去離子水為空白，測(cè)得的懸濁液的弛豫時(shí)間T1/T2相比無(wú)菌的去離子水有顯著降低，則說(shuō)明含有磁珠，從而間接證明樣本中有目標(biāo)致病菌，磁珠的量與T1/T2的下降呈正比，可以通過(guò)加標(biāo)定量磁珠而間接定量出目標(biāo)菌的量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于γ-Fe₂O₃的NMR納米探針食源性致病菌的快速檢測(cè)方法，其特征是所述NMR納米探針為γ-Fe₂O₃材料，γ晶形的納米粒徑小于1000納米。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于γ-Fe₂O₃的NMR納米探針食源性致病菌的快速檢測(cè)方法，其特征是所述的目標(biāo)菌的最終檢出評(píng)價(jià)方法基于核磁共振技術(shù)的弛豫時(shí)間特性參數(shù)的變化。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于γ-Fe₂O₃的NMR納米探針食源性致病菌的快速檢測(cè)方法，其特征是所述NMR弛豫時(shí)間特性，是指自旋-晶格弛豫時(shí)間(T1)和自旋-自旋弛豫時(shí)間(T2)。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于γ-Fe₂O₃的NMR納米探針食源性致病菌的快速檢測(cè)方法，其特征是所述弛豫時(shí)間特性，T1采用180°-τ-90°脈沖方法測(cè)定，T2采用CPMG序列方法測(cè)定。