[發明專利]檢測常見食品過敏原特異性引物及試劑盒

無效

• 申請號: 201310018731.4
• 申請日: 2013-01-18
• 公開（公告）號: CN103060461A
• 公開（公告）日: 2013-04-24
• 發明（設計）人: 王磊;曹勃陽;劉向前;陳敏;馮露
• 申請（專利權）人: 天津生物芯片技術有限責任公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 天津市杰盈專利代理有限公司 12207
• 代理人: 朱紅星

技術領域

本發明涉及一種多重PCR快速檢測的方法及其應用，尤其涉及一種可同時用于檢測芹菜、魚、大豆、杏仁四種常見食品過敏原的PCR技術及其所用PCR引物的序列。

背景技術

食物過敏（food?allergy）也稱為食物變態反應(?food?allergy）或消化系統變態反應(allergic?reaction?of?digestive?system）、過敏性胃腸炎等，是由于某種食物或食品添加劑等引起的IgE介導和非IgE介導的免疫反應，而導致消化系統內或全身性的變態反應。發病機制：致敏抗原激活腸固有膜的IgE漿細胞產生大量的IgE抗體，并與肥大細胞結合，固定在這些細胞的表面。當食物中的致敏原再次進入體內與胃腸黏膜肥大細胞表面的IgE相結合，使肥大細胞激活脫顆粒釋放一系列參與過敏反應的炎癥介質，使血管通透性增加，引起Ⅰ型變態反應部分抗原物質也可選擇性地與漿細胞IgG、IgM、IgA或T細胞結合，形成免疫復合物，從而引起局部或（和）全身性的Ⅲ型或Ⅳ型變態反應。

???食物的種類成千上萬，其中只有一部分容易引起過敏。同族的食物常具有類似的致敏性，尤以植物性食品更為明顯，如對花生過敏的患者對其它豆科類植物也會有不同程度的過敏。各國家、各地區的飲食習慣不同，機體對食物的適應性也就有相應的差異，因而致敏的食物也不同，比如西方人認為羊肉極少引起過敏，但在中國羊肉比豬肉的致敏性高；西方人對巧克力、草莓、無花果等過敏較多，在中國則極少見到。根據西方的資料，易引起過敏的食物為牛奶、雞蛋、巧克力、小麥、玉米、堅果類、花生、橘子、檸檬、草莓、洋蔥、豬肉，某些海產及魚類，蛤蚌、火雞及雞等。在中國容易引起過敏的食物有以下幾類：?　　

??⑴??富含蛋白質的食物：如牛奶、雞蛋；?　　

??⑵??海產類：如魚、蝦、蟹、海貝、海帶；?　　

??⑶??有特殊氣味的食物：如洋蔥、蒜、蔥、韭菜、香菜、羊肉；?　　

??⑷??有刺激性的食物：如辣椒、胡椒、酒、芥末、姜；?　　

??⑸??某些生食的食物：如生番茄、生花生、生栗子、生核桃、桃、葡萄、柿子等；?　　

??⑹??某些富含細菌的食物：如死的魚、蝦、蟹，不新鮮的肉類；?　　

??⑺??某些含有真菌的食物：如蘑菇、酒糟、米醋；?　　

??⑻??富含蛋白質而不易消化的食物：如蛤蚌類、魷魚、烏賊；?　　

??⑼??種子類食物：如各種豆類、花生、芝麻；?　　

??⑽??一些外來而不常吃的食物等等。

當前食物過敏原檢測方法主要有免疫學法和核酸擴增法，然而無論ELISA方法還是核酸檢測方法，通常只能同時檢測1種過敏原，而在實際食品檢測中，需要對過敏原進行篩查檢測，即對多種過敏原進行同時檢測。

發明內容

本發明中以DNA為檢測目標，選取4種食物樣品，建立多重PCR方法同時檢測4種常見食物過敏原的技術并建立了相應的多重PCR檢測試劑盒，為快速檢測與鑒定常見致病菌提供有效的手段。

為實現上述目的，本發明公開了如下的技術內容：

一種用于檢測食品過敏原的特異性PCR引物，其特征在于所述的特異性引物如SEQ?ID?NO:1-SEQ?ID?NO:8所示的核苷酸序列。

本發明所述的特異性引物，其中的特異性引物為：（1）芹菜的MTD基因、（2）魚的線粒體16S、（3）大豆的Lectin基因、（4）杏仁的Pru?dul基因。

特異性引物序列為：

SEQ?NO:1??TTTGATCCACCGACTTACAGCC?芹菜MTD基因的上游引物；

SEQ?NO:2??ATAAAAACAGATAACGCTGACTCATCAC?芹菜MTD基因的下游引物；

SEQ?NO:3??ATAACAGCGCAATCCTCTCCC?魚線粒體16S的上游引物；

SEQ?NO:4??GCTGCACCATTAGGATGTCCT?魚線粒體16S的下游引物；

SEQ?NO:5??ACCTTGGTACTGGTGCTAC?大豆Lectin基因的上游引物；

SEQ?NO:6??ACCTTGGCTACTTTATTGTT?大豆Lectin基因的下游引物；

SEQ?NO:7??TTTGGTTGAAGGAGATGCTC?杏仁Pru?dul基因的上游引物；

SEQ?NO:8??TAGTTGCTGGTGCTCTTTATG?杏仁Pru?dul基因的下游引物。