[發明專利]一種免疫基底的制備方法及抗原或抗體的免疫檢測方法

有效

• 申請號: 201310015549.3
• 申請日: 2013-01-16
• 公開（公告）號: CN103116019A
• 公開（公告）日: 2013-05-22
• 發明（設計）人: 周駿;束磊;馬亞楠;王彬彬;賴魏;張琪;顏承恩
• 申請（專利權）人: 寧波大學
• 主分類號: G01N33/531
• 分類號: G01N33/531;G01N33/558;G01N21/65
• 代理公司: 寧波奧圣專利代理事務所(普通合伙) 33226
• 代理人: 周玨

1.一種免疫基底的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

①-1、將單面拋光的硅片浸入有機溶劑中，并對硅片進行超聲波清洗20～40分鐘，然后用去離子水沖洗超聲波清洗后的硅片，再對沖洗干凈的硅片進行干燥處理；

①-2、在冰浴條件下，按體積比為1:3的比例，將質量百分比為20%～40%的過氧化氫溶液緩慢加入到質量百分比為80%～98%的濃硫酸溶液中，制備得到氧化劑溶液；

①-3、將經步驟①-1清洗并干燥過的硅片浸入由步驟①-2制備得到的氧化劑溶液中，在氧化劑溶液中反應0.5～1小時以去除硅片上的有機物，之后取出硅片，用去離子水沖洗硅片數次，然后對硅片進行干燥處理；

①-4、將經步驟①-3處理后的硅片浸入質量百分比為5%～20%的氫氟酸溶液中，在氫氟酸溶液中反應0.5～1小時后，立即取出硅片并浸入質量百分比為1%～3%的硝酸銀溶液或質量百分比為0.05%～2%的氯金酸溶液中，緩慢攪拌1～3分鐘，即得到銀納米粒子或金納米粒子修飾的硅片，取出硅片進行干燥處理；

①-5、將用于進行抗原檢測的抗體溶液或用于進行抗體檢測的抗原溶液滴加到經步驟①-4處理后得到的銀納米粒子或金納米粒子修飾的硅片的拋光面上，并在溫度為2～8℃、濕度為40～80%的條件下靜置10～12小時，之后依次用三羥甲基氨基甲烷緩沖液和去離子水沖洗硅片，以去除未吸附到銀納米粒子或金納米粒子上的抗體或抗原，最后對吸附有抗體或抗原的銀納米粒子或金納米粒子修飾的硅片進行干燥處理；

①-6、在經步驟①-5處理后的硅片的拋光面上，滴加與步驟①-5中滴加的抗體溶液或抗原溶液相同體積的牛血清白蛋白溶液，在室溫下反應2～4小時，之后依次用含有0.05%?Tween?20的三羥甲基氨基甲烷緩沖液、三羥甲基氨基甲烷緩沖液和去離子水對硅片進行沖洗，以去除未吸附到銀納米粒子或金納米粒子上的牛血清白蛋白，再對硅片進行干燥處理，制備得到具有特異性選擇功能的免疫基底。

2.根據權利要求1所述的一種免疫基底的制備方法，其特征在于所述的步驟①-1中的有機溶劑為丙酮或酒精或甲苯。

3.根據權利要求1或2所述的一種免疫基底的制備方法，其特征在于所述的步驟①-5中所滴加的抗體溶液為一種抗體的溶液或為多種抗體的混合溶液，所滴加的抗體溶液的濃度為1～3mg/ml；或所滴加的抗原溶液為一種抗原的溶液或為多種抗原的混合溶液，所滴加的抗原溶液的濃度為1～3mg/ml。

4.根據權利要求3所述的一種免疫基底的制備方法，其特征在于所述的步驟①-5中所滴加的抗體溶液的種類由待檢測的抗原決定；或所滴加的抗原溶液的種類由待檢測的抗體決定。

5.根據權利要求4所述的一種免疫基底的制備方法，其特征在于所述的步驟①-5中所滴加的抗體溶液的體積由所選用的硅片的拋光面的大小決定；或所滴加的抗原溶液的體積由所選用的硅片的拋光面的大小決定。

6.根據權利要求5所述的一種免疫基底的制備方法，其特征在于所述的步驟①-6中所滴加的牛血清白蛋白溶液的質量百分比為2～4%。