[發(fā)明專(zhuān)利]一種檢測(cè)三聚氰胺的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310014881.8
• 申請(qǐng)日: 2013-01-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103091419A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-05-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王旭霞;康紅彥;劉翠霞;劉海燕;李啟明
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 新希望乳業(yè)控股有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N30/02
• 分類(lèi)號(hào): G01N30/02
• 代理公司: 四川力久律師事務(wù)所 51221
• 代理人: 劉雪蓮;曹晉玲

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種色譜檢測(cè)方法，特別涉及一種三聚氰胺的高效液相色譜檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

三聚氰胺，即1,3,5-三嗪-2,4,6-三胺，是一種三嗪類(lèi)含氮雜環(huán)有機(jī)化合物。幾乎無(wú)味，微溶于水（3.1g/L常溫），可溶于甲醇、甲醛、乙酸、熱乙二醇、甘油、吡啶等，不溶于丙酮、醚類(lèi)。與甲醛縮合聚合可制得三聚氰胺樹(shù)脂，一種熱固性樹(shù)脂，具有良好的耐電弧性、耐熱性及耐堿性,被廣泛用于塑料及涂料工業(yè)。

蛋白質(zhì)中含有大量氮元素，以常用的凱氏定氮法測(cè)定產(chǎn)品中的蛋白質(zhì)含量時(shí)，不能區(qū)分三聚氰胺和蛋白質(zhì)中的氮元素，因而一些不良廠家將三聚氰胺添加到飼料和食品中，提高產(chǎn)品中蛋白質(zhì)的檢測(cè)數(shù)值，降低生產(chǎn)成本，牟取暴利。

現(xiàn)有國(guó)標(biāo)檢測(cè)三聚氰胺的方法是《GB/T22400-2008原料乳三聚氰胺快速檢測(cè)液相色譜法》（下文簡(jiǎn)稱(chēng)GB/T22400）和《GB/T22388-2008原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測(cè)方法》（下文簡(jiǎn)稱(chēng)GB/T22388）。

GB/T22388中包含多種檢測(cè)方法，運(yùn)用高效液相色譜、液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果精確度高。但檢測(cè)時(shí)間通常較長(zhǎng)，且所需設(shè)備要求較高，在一般企業(yè)內(nèi)部質(zhì)量控制部門(mén)進(jìn)行抽樣檢測(cè)時(shí)，容易受到條件限制。

一般企業(yè)是按照GB/T22388第一法高效液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)的，GB/T22388第一法的檢測(cè)條件：流動(dòng)相為離子對(duì)試劑緩沖溶液與乙腈比例為85：15(v/v)或90：10(v/v)的混合溶液，流速為1.0ml/min，儀器正常壓力為1500-1600psi。流動(dòng)相比例為85：15(v/v)時(shí)，保留時(shí)間16-18min；流動(dòng)相比例為90：10(v/v)，保留時(shí)間29-31min。檢測(cè)的全過(guò)程約需2小時(shí)，耗時(shí)長(zhǎng)，效率低，不便于需要快速得到檢測(cè)結(jié)果的情況。其主要原因在于其前處理中用到的固相萃取凈化步驟耗時(shí)長(zhǎng)，通常情況下僅固相萃取一步就需要約1小時(shí)。若是省略前處理中的固相萃取柱凈化步驟，雖然可以加快檢測(cè)速度，但很可能會(huì)受到雜質(zhì)峰的干擾，影響定性定量分析。

為克服需要快速檢測(cè)情況下GB/T22388的不足，國(guó)家質(zhì)檢部門(mén)又推出GB/T22400檢測(cè)方法。GB/T22400檢測(cè)速度快，其色譜條件為：強(qiáng)離子交換色譜柱，SCX，250mm×4.6mm（i.d.），5μm，流速為1.5ml/min。其中色譜柱并非常用C₈、C₁₈色譜柱，且價(jià)格較常用色譜柱高，儀器正常運(yùn)行情況下，柱壓為2500-2600psi；高柱壓下色譜柱使用壽命較短，對(duì)于需要長(zhǎng)期大量進(jìn)行原料乳中三聚氰胺檢測(cè)的乳品企業(yè)而言，檢測(cè)成本較高。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中檢測(cè)速度慢和檢測(cè)成本高的缺陷，提供一種快速、結(jié)果準(zhǔn)確的檢測(cè)原料乳中三聚氰胺的方法。

為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供了以下技術(shù)方案：

一種檢測(cè)三聚氰胺的方法，包括以下步驟：

（1）制備三聚氰胺的標(biāo)準(zhǔn)溶液，利用高效液相色譜儀對(duì)其檢測(cè)，得三聚氰胺保留時(shí)間，并生成濃度與峰面積之間對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

（2）取樣品進(jìn)行預(yù)處理，得到分析試樣，利用所述高效液相色譜儀在與步驟（1）相同的條件下對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，得到所述樣品的檢測(cè)結(jié)果；

（3）將步驟（2）中獲得的所述樣品的檢測(cè)結(jié)果與步驟（1）中得到的所述標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比對(duì)，計(jì)算確定樣品中三聚氰胺的含量；

所述步驟（2）中的預(yù)處理包括以下步驟：稱(chēng)取樣品（若為奶粉制品，加入純水還原，并記錄原始數(shù)據(jù)，計(jì)算稀釋倍數(shù)），加入乙腈劇烈震蕩混合6min，充分混勻后靜置3min，4000-8000r/min轉(zhuǎn)速離心5-10min，吸取上清液過(guò)濾，收集濾液，作為高效液相色譜儀分析試樣。

進(jìn)一步的，上述過(guò)濾步驟用0.22μm有機(jī)相濾膜過(guò)濾。

進(jìn)一步的，所述步驟（1）中高效液相色譜使用的流動(dòng)相為70/30（體積比）離子對(duì)試劑緩沖溶液-乙腈。

所述離子對(duì)試劑緩沖溶液為含1.0g/L十二烷基磺酸鈉和20mmol/L磷酸的水溶液。

進(jìn)一步的，上述流動(dòng)相超聲處理30-40min，經(jīng)0.22μm有機(jī)相濾膜過(guò)濾后使用，效果更佳。超聲處理使流動(dòng)相更加均勻，檢測(cè)分析得到的結(jié)果更加穩(wěn)定可靠。

進(jìn)一步的，所述步驟（1）中高效液相色譜條件：流速0.8-1.0ml/min；柱溫40℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：240nm；進(jìn)樣量：20μL。