[發(fā)明專利]重組人的脫氧核糖核酸酶I的新應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310014825.4
• 申請(qǐng)日: 2013-01-15
• 公開（公告）號(hào): CN103920144A
• 公開（公告）日: 2014-07-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳莊民
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海博戍生物科技有限公司
• 主分類號(hào): A61K38/46
• 分類號(hào): A61K38/46;A61P11/00;A61P29/00
• 代理公司: 上海和躍知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31239
• 代理人: 杜林雪

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物制藥領(lǐng)域，具體涉及基因重組人的脫氧核糖核酸酶I（rhDNaseI）在制備治療肺損傷和風(fēng)濕病的藥中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

人的脫氧核糖核酸酶I一類內(nèi)切核酸酶，作用于DNA的磷酸二酯鍵，催化DNA水解。編號(hào)為EC3.1.21.1。

即Deoxyribonuclease，中文名稱為脫氧核糖核酸酶，是一種可以消化單鏈或雙鏈DNA產(chǎn)生單脫氧核苷酸或單鏈或雙鏈的寡脫氧核苷酸的核酸內(nèi)切酶。

DNaseI，即DeoxyribonucleaseI，中文名稱為脫氧核糖核酸酶I，是一種可以消化單鏈或雙鏈DNA產(chǎn)生單脫氧核苷酸或單鏈或雙鏈的寡脫氧核苷酸的核酸內(nèi)切酶。DNaseI水解單鏈或雙鏈DNA后的產(chǎn)物，5'端為磷酸基團(tuán)，3'端為羥基。

DNaseI活性依賴于鈣離子，并能被鎂離子或二價(jià)錳離子激活。鎂離子存在條件下，DNaseI可隨機(jī)剪切雙鏈DNA的任意位點(diǎn)；二價(jià)錳離子存在條件下，DNaseI可在同一位點(diǎn)剪切DNA雙鏈，形成平末端，或1-2個(gè)核苷酸突出的粘末端。

脫氧核糖核酸酶I目前臨床上被用于和粘膜作用相關(guān)的治療支氣管擴(kuò)張、肺膿瘍、囊性肺纖維化以及口腔科疾病等。

基因重組人的脫氧核糖核酸酶I（rhDNaseI）含有260個(gè)氨基酸的多肽鏈，具有總分子質(zhì)量為37000道爾頓，分子式為C₁₃₂₁H₁₉₉₅O₃₉₆S₉。

肺損傷屬于胸外科疾病，肺臟對(duì)穿透性損傷(除高速投射物外)相對(duì)容易耐受，肺實(shí)質(zhì)有很好的修復(fù)能力，除非肺門結(jié)構(gòu)受損，一般肺組織的漏氣和出血很快會(huì)停止，周圍部分的實(shí)質(zhì)損傷很少需要切除；另一方面，鈍性肺損傷雖然造成較小程度的局部損傷，但由于多發(fā)性損傷的總面積加大和繼發(fā)反應(yīng)性改變，它能導(dǎo)致較嚴(yán)重、甚至危及生命的并發(fā)癥。

急性肺損傷(acutelunginjury，ALI)是各種直接和間接致傷因素導(dǎo)致的肺泡上皮細(xì)胞及毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，造成彌漫性肺間質(zhì)及肺泡水腫，導(dǎo)致的急性低氧性呼吸功能不全。以肺容積減少、肺順應(yīng)性降低、通氣/血流比例失調(diào)為病理生理特征，臨床上表現(xiàn)為進(jìn)行性低氧血癥和呼吸窘迫，肺部影像學(xué)上表現(xiàn)為非均一性的滲出性病變，其發(fā)展至嚴(yán)重階段（氧合指數(shù)<200）被稱為急性呼吸窘迫綜合征（acute?respiratory?distress?syndrome，ARDS）。引起ALI的原因包括感染、理化因素?fù)p傷、自身免疫等，目前臨床缺乏特異的治療手段，僅以去除可能的誘因、對(duì)癥處理、必要時(shí)機(jī)械通氣支持為主。現(xiàn)有的治療方法主要聚焦于抑制炎癥因子、減輕炎癥反應(yīng)，或改善氧合、糾正缺氧，或促進(jìn)肺內(nèi)滲出的吸收，包括糖皮質(zhì)激素、己酮可可堿、利索茶堿、抗氧化劑、集落細(xì)胞刺激因子、表面活性物質(zhì)、液體通氣、一氧化氮(NO)、活化蛋白C等，但均缺乏足夠的循證醫(yī)學(xué)證據(jù)的支持。

風(fēng)濕病是一組侵犯關(guān)節(jié)、骨骼、肌肉、血管及有關(guān)軟組織或結(jié)締組織為主的疾病，其中多數(shù)為自身免疫性疾病。發(fā)病多較隱蔽而緩慢，病程較長(zhǎng)，且大多具有遺傳傾向。診斷及治療均有一定難度；血液中多可檢查出不同的自身抗體，可能與不同HLA亞型有關(guān)；對(duì)非甾類抗炎藥(NSAID)，糖皮質(zhì)激素和免疫抑制劑有較好的短期或長(zhǎng)期的緩解性反應(yīng)。

急性間質(zhì)性肺炎（AIP）為一種罕見的發(fā)展迅速的暴發(fā)性肺損傷。為肺的急性損傷性病變。起病急劇（數(shù)日至數(shù)周內(nèi)），表現(xiàn)為發(fā)熱、咳嗽和氣急，繼之出現(xiàn)呼吸衰竭，酷似原因不明的特發(fā)性ARDS。AIP病死率極高(>60%），多數(shù)在1～2個(gè)月內(nèi)死亡。臨床非感染性AIP代表性的例子包括：百草枯中毒、彌漫性結(jié)締組織病所致的AIP和后繼的不可逆的肺纖維化。其可能存在共有的肺損傷致病通路，而其中百草枯中毒構(gòu)成了非常獨(dú)特的疾病模型。

百草枯（paraquat,PQ）化學(xué)名1,1’-二甲基-4,4’聯(lián)吡啶二氯化物，是一種廣泛使用的有機(jī)雜環(huán)類接觸性脫葉劑及除草劑。從1962年應(yīng)用于農(nóng)業(yè)以來(lái)，PQ急性中毒和死亡的病例報(bào)道屢見不鮮。PQ中毒可以分為兩個(gè)階段，首先是以ALI/AIP為主要表現(xiàn)的炎癥性階段，在數(shù)天內(nèi)出現(xiàn)肺水腫、細(xì)胞浸潤(rùn)和肺泡出血；從該階段存活下來(lái)的患者將會(huì)發(fā)展到進(jìn)一步的肺纖維化增殖階段，該過(guò)程持續(xù)數(shù)周時(shí)間，最終患者以呼吸衰竭死亡，其死亡率極高（75%-100%）。PQ中毒的毒理機(jī)制不明，急需研究其確切的致病機(jī)理，并在此基礎(chǔ)上發(fā)展有效的干預(yù)手段。對(duì)PQ所致的ALI的探索不僅有助于解決該致死性的臨床毒理難題，對(duì)其他原因所致的ALI/AIP也將提供重要的干預(yù)線索。