[發明專利]一種甘蔗葉的定性鑒別HPLC指紋圖譜檢測方法

無效

• 申請號: 201310014800.4
• 申請日: 2013-01-16
• 公開（公告）號: CN103149282A
• 公開（公告）日: 2013-06-12
• 發明（設計）人: 侯小濤;鄧家剛;馬麗娜
• 申請（專利權）人: 廣西中醫藥大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/88
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種甘蔗葉的定性鑒別HPLC指紋圖譜檢測方法，屬于中藥的分析檢測領域。?

背景技術

甘蔗葉是禾本科植物甘蔗Saccharum?sinensis?Roxb.的葉。甘蔗廣泛種植于熱帶、亞熱帶地區，我國甘蔗種植蔗區主要分布在廣西、廣東、臺灣、福建及云南等地。甘蔗葉含有氨基酸、多糖和黃酮類等物質，其嫩葉和蔗梢含過氧化物酶等物質，具有抗氧化、抗菌、降血糖、抗腫瘤等藥理作用。國內外對甘蔗葉的研究并不多見，僅提取工藝、藥效學篩選等報道。?

中藥成分極其復雜，臨床用藥強調整體性，測定少數幾種有效成分或指標成分，不足以確保藥材或制劑質量，應該建立全面反映所含成分的指紋圖譜，將更加有效地體現中藥成分的整體性和綜合作用，從而更好地評價中藥的質量。中藥指紋圖譜作為一種有效的質量控制模式，以其科學的理論依據獲得國際上的一致認可。?

發明內容

本發明的解決方案是提供一種甘蔗葉的定性鑒別HPLC指紋圖譜檢測方法，此方法簡單、穩定、可靠、重復性好，可作為甘蔗葉的鑒定方法。?

本發明一種甘蔗葉的定性鑒別HPLC指紋圖譜的測定包括以下步驟：?

1供試品溶液的制備：稱取樣品2g按料液比1∶25加入70％乙醇回流提取2h，減壓濃縮，將濃縮樣品上大孔樹脂柱，先用100ml水洗脫洗至無色，然后用100ml70％乙醇洗脫，將洗脫液濃縮，并甲醇定容至5ml容量瓶，離心，備用。?

2色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱為固定相，甲醇-0.1％冰乙酸水溶液為流動相，按以下體積百分比條件進行梯度洗脫：0～5min，20％A，5～15min，20％～28％A，15～30min，28％～34％A，30～40min，34％A，40～45min，34％～42％A，45～70min，42％～50％A，70～95min，50％～65％A；柱溫25℃，檢測器為紫外吸收檢測器，檢測波長320nm，流速1.0ml·min^-1。?

3測定方法：精密吸取供試品溶液20μL，按設定的色譜條件進樣，測定，即得。在此條件下獲取的甘蔗葉對照指紋圖譜見附圖1。?

下面對本分析方法的建立作進一步的描述：?

1供試品溶液的制備方法考察?

1.1提取方法的考察?

根據試驗要求比較了超聲和回流兩種提取方法，結果見附圖2、3。從圖中可以看出由不同提取方法提取后的甘蔗葉的色譜圖的性狀及色譜峰的數目基本一致，回流提取2h比超聲提取30min提取更加完全(色譜峰強度大)，因此，選用回流提取法進行甘蔗葉中有效成分提取。?

1.2樣品除雜方法的考察?

考慮到樣品顏色較深，色素較多，因此考察了除雜方法。實驗中比較了石油醚萃取和大孔樹脂洗脫兩種方法，見附圖4、5。從圖中可以看出石油醚除雜方法處理的甘蔗葉的色譜圖基線飄動比較大，小的雜峰比較密集，經過大孔樹脂洗脫的甘蔗葉的色譜圖基線較為平穩，而且雜峰較少，因此甘蔗葉除雜方法選用樣品經大孔樹脂洗脫。?

2色譜條件的選擇?

2.1色譜柱的選擇?

分別采用不同的十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，在同一臺高效液相色譜儀(美國Agilent1100Series：四元泵，自動進樣器，柱溫箱，紫外吸收檢測器)上，取同一甘蔗葉供試品，在相同的色譜條件下進樣分析，進樣量為20μL，檢測色譜圖，結果見附圖6、7、8。實驗結果表明，除了AgilentC₁₈(5μm，4.6mm×250mm)色譜柱外，其他各種品牌的色譜柱均可得到相似的色譜圖。其中以AgilentC₁₈(5μm，4.6mm×250mm)分離效果最好，且穩定性好，故優選的最佳色譜柱為AgilentC₁₈(5μm，4.6mm×250mm)。?

2.2流動相系統的選擇?

分別考察了甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0.1％冰乙酸水溶液、甲醇-0.2％冰乙酸水溶液系統對甘蔗葉的HPLC色譜圖進行了考察。結果見附圖9、10、11、12。相同條件下甲醇-水與乙腈-水梯度洗脫，后者色譜圖中的色譜峰不但密集而且分離效果不好，故選定用甲醇-水洗脫后，加不同比例的冰乙酸，改善峰型，減少色譜峰的拖尾。結果表明甲醇-0.1％冰乙酸水溶液系統的效果最佳，采用該系統各個色譜峰的峰型和分離度均較好，因此選定該系統作為流動相。?

2.3檢測波長的選擇?