[發明專利]一種氟喹諾酮類藥物殘留快速檢測試紙卡及其制備方法

有效

• 申請號: 201310014748.2
• 申請日: 2013-01-16
• 公開（公告）號: CN103091495A
• 公開（公告）日: 2013-05-08
• 發明（設計）人: 姜金慶;陳俊杰;張曉建;李桂平;楊志;孟曉梅;原小燕;栗克文;周麗霞;杜同亮
• 申請（專利權）人: 河南知微生物工程有限公司;河南科技學院
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N21/78;G01N33/531
• 代理公司: 新鄉市平原專利有限責任公司 41107
• 代理人: 于兆惠

1.一種氟喹諾酮類藥物殘留快速檢測試紙卡，其特征在于：所述的氟喹諾酮類藥物殘留快速檢測試紙卡包括塑料盒體和封裝于塑料盒體內的試紙條，所述試紙條的底層為支撐層，該支撐層上由左到右依次附著有緊密相連的樣品墊、金標抗體結合墊、硝酸纖維素膜和吸收墊，所述的塑料盒體上開有加樣孔和觀察窗，該加樣孔的位置與試紙條上的樣品墊位置相對應，觀察窗與試紙條上的硝酸纖維素膜位置相對應，所述的硝酸纖維素膜上有諾氟沙星－雞卵清白蛋白偶聯物溶液印制的檢測線和羊抗鼠IgG溶液印制的質控線，所述的結合墊上灌注有膠體金標記的抗氟喹諾酮類藥物類特異性單克隆抗體。

2.根據權利要求1所述的一種氟喹諾酮類藥物殘留快速檢測試紙卡，其特征在于：所述的樣品墊、金標抗體結合墊和吸收墊上方覆蓋有膠膜保護層。

3.根據權利要求1所述的一種氟喹諾酮類藥物殘留快速檢測試紙卡，其特征在于：所述的膠體金標記的抗氟喹諾酮類藥物類特異性單克隆抗體是由環丙沙星－牛血清白蛋白偶聯物免疫Balb/C小鼠制備而來的。

4.根據權利要求1所述的一種氟喹諾酮類藥物殘留快速檢測試紙卡，其特征在于：所述的氟喹諾酮類藥物為環丙沙星、諾氟沙星、恩諾沙星、培氟沙星、依諾沙星、沙拉沙星、氧氟沙星、洛美沙星和麻保沙星中的至少一種。

5.一種權利要求1所述的氟喹諾酮類藥物殘留快速檢測試紙卡的制備方法，其特征在于：首先將樣品墊、金標抗體結合墊、硝酸纖維素膜和吸收墊按照由左到右的順序附著于支撐層上，所述的硝酸纖維素膜上有諾氟沙星－雞卵清白蛋白偶聯物溶液印制的檢測線和羊抗鼠IgG溶液印制的質控線，然后用切割機制成試紙條，然后將試紙條封裝于帶有加樣孔和觀察窗的塑料盒體內，制得氟喹諾酮類藥物殘留快速檢測試紙卡。

6.根據權利要求5所述的氟喹諾酮類藥物殘留快速檢測試紙卡的制備方法，其特征在于所述樣品墊的制備方法為：將玻璃纖維棉用含有質量濃度為2%?的BSA、質量濃度為1%的蔗糖、質量濃度為0.5%?的硼酸鈉和質量濃度為0.1%的?NaN₃的PBS緩沖液處理后，干燥備用，即為樣品墊。

7.根據權利要求5所述的氟喹諾酮類藥物殘留快速檢測試紙卡的制備方法，其特征在于所述金標抗體結合墊的制備方法為：將玻璃纖維棉裁成4?mm寬的細條，放入含有質量濃度為5%?的BSA、質量濃度為2%的蔗糖、質量濃度為0.8%?的NaCl和質量濃度為0.05%?的NaN₃的PBS緩沖液中20?min，37?℃恒溫烘干，然后將金標抗體灌注已處理好的玻璃纖維棉上，真空凍干4?h，即為金標抗體結合墊。

8.根據權利要求5所述的氟喹諾酮類藥物殘留快速檢測試紙卡的制備方法，其特征在于所述硝酸纖維素膜的制備方法為：將硝酸纖維素膜置于X-only單向噴點儀平臺上，檢測抗原放于A池，RaMIgG放于B池，展平壓緊，開機后將抗原和二抗分別點射于硝酸纖維素膜上，形成檢測線和質控線，室溫自然干燥后，將其浸入BSA質量濃度為1%的PBS緩沖液，pH值為7.4的封閉液中30?min，37?℃烘干后，加入干燥劑，4?℃密封保存。

9.根據權利要求5所述的氟喹諾酮類藥物殘留快速檢測試紙卡的制備方法，其特征在于所述諾氟沙星－雞卵清白蛋白偶聯物的制備方法為：將36?mg諾氟沙星溶解于2?mL?DMF和2?mL二氧六環中，4?℃預冷30?min，加入20?μL三丁胺，冰浴10?min后加入40?μL氯甲酸異丁酯，反應60?min，即A液，將40?mg雞卵清白蛋白溶解于5?mL?pH值為9.6的Na₂CO₃的緩沖溶液中，即B液，將A液逐滴加入到B液中，避光振蕩反應4?h，反應完成后先用蒸餾水透析3?d，再用PBS緩沖液透析3?d，紫外掃描透析液無小分子吸收峰時分裝于安瓿瓶中，－20?℃凍干保存。

10.根據權利要求5所述的氟喹諾酮類藥物殘留快速檢測試紙卡的制備方法，其特征在于所述吸收墊的制備方法為：將以植物長纖維為原材料制作的純白濾紙用切割機切成4?mm寬的細條，并用膠膜進行一側封閉，干燥備用，即為吸收墊。