[發明專利]一種釀酒酵母工程菌及其應用與飼料添加劑

在審

• 申請號: 201310013774.3
• 申請日: 2013-01-15
• 公開（公告）號: CN103074241A
• 公開（公告）日: 2013-05-01
• 發明（設計）人: 彭子欣;謝飛;馮秋月;吳雅琨;陳慧鑫;王安如
• 申請（專利權）人: 北京大北農科技集團股份有限公司;北京科高大北農飼料有限責任公司;浙江大北農農牧科技有限公司
• 主分類號: C12N1/19
• 分類號: C12N1/19;C12N15/12;C12N15/81;A23K1/16;C12R1/865
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種釀酒酵母(Saccharomyces?cerevisiae)工程菌，其是將豬防御素pBD2成熟肽的編碼序列和釀酒酵母信號肽的編碼序列克隆到釀酒酵母表達載體上，得到重組載體，將該重組載體轉化入釀酒酵母中，得到具有抑菌活性的酵母菌。

2.根據權利要求1所述的釀酒酵母工程菌，其特征在于：所述釀酒酵母為釀酒酵母YS58。

3.根據權利要求1所述的釀酒酵母工程菌，其特征在于：所述釀酒酵母表達載體為pAUR123。

4.根據權利要求1所述的釀酒酵母工程菌，其特征在于：所述豬防御素pBD2成熟肽序列是指pBD2的26～69位氨基酸序列，所述釀酒酵母信號肽序列是指克隆自畢赤酵母表達質粒pPICZαA的第941-1207位基因編碼的89個氨基酸殘基的釀酒酵母信號肽序列。

5.根據權利要求1～4任一項所述的釀酒酵母工程菌，其保藏編號為CGMCC?No.6921。

6.一種構建權利要求1～5任一項所述的釀酒酵母工程菌的方法，將編碼豬防御素pBD2成熟肽的DNA序列和編碼釀酒酵母信號肽的DNA序列克隆入酵母表達載體pAUR123，得到具有抑菌功能的釀酒酵母工程菌，所述豬防御素pBD2成熟肽序列為豬防御素pBD2的26～69位氨基酸序列，所述釀酒酵母信號肽序列為克隆自畢赤酵母表達載體的含有89個氨基酸殘基的釀酒酵母信號肽序列。

7.根據權利要求6所述方法，其特征在于：通過PCR擴增出豬防御素pBD2基因編碼第26～69位氨基酸的基因序列，通過擴增引物在基因5’端導入KpnI酶切位點，3’端導入SacI酶切位點，用KpnI和SacI將擴增的pBD2基因雙酶切后，連接在酵母表達載體pAUR123的KpnI和SacI酶切位點上，構建得到pABD2質粒；通過PCR方法擴增畢赤酵母表達質粒pPICZαA的釀酒酵母信號肽序列的第941-1207位基因，并通過引物在序列兩端引入KpnI酶切位點；將pABD2質粒用KpnI單酶切，將PCR得到的信號肽序列插入pABD2質粒中，得到pABD2a質粒；將pABD2a質粒轉化入釀酒酵母YS58菌株中，通過AbA抗性篩選得到具有抑菌活性的釀酒酵母。

8.權利要求1～5任一項所述的釀酒酵母工程菌在飼料添加劑上的應用。

9.含有權利要求1～5任一項所述的釀酒酵母工程菌的飼料添加劑。