[發明專利]重編程T細胞和造血細胞的方法

有效

• 申請號: 201310013588.X
• 申請日: 2010-06-04
• 公開（公告）號: CN103087991B
• 公開（公告）日: 2018-06-12
• 發明（設計）人: M·布朗;E·R·多明格斯;R·萊亞里什;E·努韋瑟;D·拉杰什;A·麥克
• 申請（專利權）人: 富士膠片細胞動力公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N5/07;C12N5/0793
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 李程達

1.用于從人CD34+造血祖細胞產生誘導的多能干細胞的體外方法，包括下列步驟：

(a)獲得人受試者的外周血樣品，所述人受試者的細胞未經過外部施用的粒細胞集落刺激因子(G-CSF)動員，并從所述外周血樣品純化CD34+造血祖細胞；

(b)使用足以擴增CD34+造血祖細胞的細胞因子在體外擴增純化的CD34+造血祖細胞；

(c)向CD34+造血祖細胞中導入一個或多個游離載體，所述游離載體包含一個或多個編碼Oct4和Sox2和選自cMyc、Klf4、Nanog、Lin28和SV40大T抗原的一個或多個增強重編程效率的因子的表達盒，其中一個或多個所述表達盒包含至少一個多順反子轉錄單位，所述多順反子轉錄單位包含至少兩個重編程因子；和

(d)在確定的、無飼養物的條件下培養CD34+造血祖細胞以提供不含整合的外源逆轉錄病毒元件的iPS細胞群體。

2.權利要求1的方法，其中所述外周血樣品是1至5ml。

3.權利要求1-2任一項的方法，其中所述外周血樣品是經冷凍保存的。

4.權利要求1的方法，其中所述多順反子轉錄單位包含內部核糖體進入位點(IRES)或編碼至少一個蛋白酶切割位點和/或自我切割肽的序列以進行多順反子轉錄。

5.權利要求1的方法，其中從群體的CD34⁺造血祖細胞產生iPS細胞進一步包括：就胚胎干細胞的一種或多種特性選擇iPS細胞。

6.權利要求1的方法，其中所述方法還包括使iPS細胞分化為分化的細胞。

7.權利要求6的方法，其中所述分化的細胞包括：心肌細胞、造血細胞、神經元、成纖維細胞或上皮細胞。