[發明專利]利用高通量組織芯片檢測GOLPH3在腦膠質瘤中的表達的方法無效
| 申請號： | 201310013304.7 | 申請日： | 2013-01-14 |
| 公開（公告）號： | CN103103263A | 公開（公告）日： | 2013-05-15 |
| 發明（設計）人： | 陳菊祥;周勁旭;徐濤;盧亦成;嚴勇;秦榮;王洪祥 | 申請（專利權）人： | 中國人民解放軍第二軍醫大學 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 上海泰能知識產權代理事務所 31233 | 代理人： | 黃志達 |
| 地址： | 200433 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 利用 通量 組織 芯片 檢測 golph3 膠質 中的 表達 方法 | ||
1.一種利用高通量組織芯片檢測GOLPH3在腦膠質瘤中的表達的方法，包括：
（1）首先構建人膠質瘤細胞的組織芯片，然后進行免疫組化染色；
（2）培養人膠質瘤細胞；
（3）在GOLPH3的cDNA序列中采用下列兩條候選序列對GOLPH3進行siRNA的敲減：
5’-CAGCGCCTCATCAAGAAA-3’和5’-GCCAACACCAATGAGGTT-3’；
（4）使用Trizol試劑進行總細胞RNA的分離，采用工具箱合成第一股cDNA鏈，進行實時PCR擴增；
（5）檢測GOLPH3在腦膠質瘤中的表達并分析數據。
2.根據權利要求1所述的一種利用高通量組織芯片檢測GOLPH3在腦膠質瘤中的表達的方法，其特征在于：步驟（3）中設計了一個shRNA序列，同時包含siRNA序列的正鏈和反鏈，采用一個環形序列來分離互補域。
3.根據權利要求1所述的一種利用高通量組織芯片檢測GOLPH3在腦膠質瘤中的表達的方法，其特征在于：步驟（4）中所述的工具箱為ReverTra?Ace?qPCR?RT工具箱。
4.根據權利要求1所述的一種利用高通量組織芯片檢測GOLPH3在腦膠質瘤中的表達的方法，其特征在于：步驟（4）中所述的擴增為在ABI?PRISM7900HT序列監測系統中進行。
5.根據權利要求1所述的一種利用高通量組織芯片檢測GOLPH3在腦膠質瘤中的表達的方法，其特征在于：步驟（4）中所述的擴增條件為先在95°下進行3分鐘，隨后95°下10秒、55°下45秒重復循環40次。
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