[發(fā)明專利]魚皮膠原基復(fù)合海綿及其制備方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310012099.2
• 申請(qǐng)日: 2013-01-14
• 公開（公告）號(hào): CN103007336A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張其清;陳名懋;郭豪;王建華;伍久林
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 福建省博特生物科技有限公司
• 主分類號(hào): A61L15/32
• 分類號(hào): A61L15/32;A61L15/28
• 代理公司: 福州元?jiǎng)?chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學(xué)俊

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種魚皮膠原基復(fù)合海綿及其制備方法。

背景技術(shù)

膠原蛋白是動(dòng)物體內(nèi)含量最豐富、分布最廣泛的蛋白質(zhì)。膠原蛋白具有獨(dú)特的三螺旋結(jié)構(gòu)、低抗原性、無(wú)毒性、良好的生物相容性和生物可降解性等特點(diǎn)，已被廣泛應(yīng)用于組織工程支架材料、止血海綿、藥物控緩釋系統(tǒng)、基因傳遞載體、美容外科等生物醫(yī)用領(lǐng)域。目前，國(guó)內(nèi)使用的膠原蛋白主要來自豬和牛的皮膚和跟腱，但隨著瘋牛病和口蹄疫等疾病的發(fā)生，使人們對(duì)它們的安全性產(chǎn)生了質(zhì)疑；由于宗教和習(xí)俗等原因，豬來源的膠原蛋白在某些地區(qū)的應(yīng)用受到了限制。因此，迫切需要尋求質(zhì)量和安全性更好的膠原蛋白來源。

我國(guó)每年魚鱗魚皮等水產(chǎn)品廢棄物約有40多萬(wàn)噸，這些水產(chǎn)品廢棄物均含有豐富的膠原蛋白（如皮、骨、鱗等），其氨基酸組成與陸生哺乳動(dòng)物膠原無(wú)明顯差異，且其不存在人畜共患的傳染性疾病，具有極大的開發(fā)和利用價(jià)值，但這些廢棄物除小部分被用于生產(chǎn)飼料外，大部分卻被丟棄?(Trends?in?Food?Science?&?Technology,?2008,?19:?644-656)。因此，開發(fā)魚皮等水產(chǎn)品廢棄物的利用新途徑，不僅可提高水產(chǎn)品加工的附加值，而且能減少環(huán)境污染，具有良好的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益。

然而，作為生物醫(yī)用材料，水產(chǎn)膠原與陸生哺乳動(dòng)物膠原存在共同的缺點(diǎn)，如體內(nèi)降解快，柔韌性差等，限制了其應(yīng)用。殼聚糖是天然多糖中唯一的堿性多糖，具有良好的生物相容性、生物可降解性、抗菌性、無(wú)毒性、低免疫原性、吸濕性、柔軟性、促凝血、防粘連等特點(diǎn)，在一定程度上彌補(bǔ)了膠原蛋白的不足之處?(Curr.?Pharm.?Biotechnol.,?2003,?4:?303)。此外，價(jià)格因素也是制約膠原蛋白類產(chǎn)品規(guī)模進(jìn)入市場(chǎng)的條件之一。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種魚皮膠原基復(fù)合海綿及其制備方法。由本發(fā)明制備的復(fù)合海綿，可改善膠原海綿易降解等缺點(diǎn)，且其制備過程簡(jiǎn)單、價(jià)廉易得，克服了現(xiàn)有膠原海綿的一些不足。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供的一種魚皮膠原基復(fù)合海綿的制備方法，包括以下步驟：將魚皮膠原蛋白與殼聚糖溶于體積分?jǐn)?shù)為2%的乙酸溶液中，攪拌均勻，然后倒入透析袋，用體積分?jǐn)?shù)為2%的乙酸溶液作為外液透析20-30h，冷凍干燥后添加交聯(lián)劑進(jìn)行交聯(lián)，交聯(lián)產(chǎn)物反復(fù)用蒸餾水沖洗至中性，二次冷凍干燥即得魚皮膠原基復(fù)合海綿。

所述魚皮膠原蛋白的制備方法如下：

1）魚皮去鱗，剪碎洗凈，于10-30倍原料重的含體積分?jǐn)?shù)為0.1-1%?H₂O₂的NaOH溶液中攪拌浸泡12-48?h，清水洗至中性；繼續(xù)在異丙醇溶液中攪拌浸泡4?h，清水洗至中性；再在NaCl溶液中攪拌浸泡10?h，離心，去除廢液，即得預(yù)處理的碎魚皮；

2）將預(yù)處理的碎魚皮與去離子水以料液比為1:5-1:10混合，勻漿，加入胃蛋白酶，調(diào)pH至2.0-4.0，酶解10-30?h，過濾、濾液低溫離心，取上清液加入體積分?jǐn)?shù)為2%乙酸溶液，過濾，濾液裝入透析袋，用體積分?jǐn)?shù)為2%的乙酸溶液作為外液透析24?h，冷凍干燥即得魚皮膠原蛋白。

步驟1）所述魚皮為包括鰱魚、草魚、青魚、鳙魚、鯊魚在內(nèi)的加工魚皮副產(chǎn)物。

步驟1）所述NaOH溶液的濃度為0.01-0.1?mol/L，所述異丙醇溶液的體積分?jǐn)?shù)為5-20%，NaCl溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1-5%，攪拌浸泡的溫度為0-20℃。

步驟2）所述胃蛋白酶占魚皮的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為2-3%，酶解溫度為4-10℃。

????所述魚皮膠原蛋白與殼聚糖的質(zhì)量比為90-70:30-10，殼聚糖的脫乙酰度為70-90%。

????所述交聯(lián)劑為體積分?jǐn)?shù)為0.2-0.3%的戊二醛或濃度為40-60mM的EDC，交聯(lián)時(shí)間為12-24?h。

????本發(fā)明還提供了由所述的制備方法制得的魚皮膠原基復(fù)合海綿。

以上所采用的透析袋的截留分子量為8000～14000?Da。

所述交聯(lián)劑還可以采用甲醛、戊二醛、EDC等。

本發(fā)明制備的魚皮膠原基復(fù)合海綿具有Ⅰ型膠原蛋白特有的三螺旋結(jié)構(gòu)，其微觀結(jié)構(gòu)為雙面多孔網(wǎng)狀片層，具有良好的吸濕性（膨脹率為2153%），并顯著改善了膠原海綿的降解性能。在為期7?d的降解時(shí)間內(nèi)，魚皮膠原基復(fù)合海綿降解率由第1?d?的31.43%變?yōu)榈?d?的77.15%。本材料制備過程簡(jiǎn)單、價(jià)廉易得，是一種較好的生物醫(yī)用材料。

附圖說明

圖1是魚皮膠原蛋白的原子力顯微鏡圖。