[發(fā)明專利]一種可高通量檢測東海原甲藻自然水樣的試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310011623.4
• 申請日: 2013-01-11
• 公開（公告）號: CN103091311A
• 公開（公告）日: 2013-05-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳國福;張春云
• 申請（專利權(quán)）人: 哈爾濱工業(yè)大學(xué)（威海）
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78
• 代理公司: 北京科億知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

1.一種可高通量檢測東海原甲藻自然水樣的試劑盒，其特征在于，其組成為：（1）?試劑A為自然樣品核酸粗提試劑，其組成為：2%?(m/v)?CTAB,?0.5%(v/v)?β-mercaptoethanol,?1.4?M?NaCl,?20?mM?EDTA,?100?mM?Tris-Cl,?10?U?RNase?Inhibitor；

（2）?試劑B為5×NASBA?Buffer，其組成為0.2?M?Tris-HCl,?60?mM?MgCl₂,?0.35?M?KCl₂,?25?mM?DTT,?20?mM?dNTP；

（3）試劑C為NTP（10?mM?each)；

（4）試劑D為5×Primer?mix，其組成為：75%?DMSO,?1?μM?NASBA-P1,?1?μM?NASBA-P2,?25?mM?DTT,?20?mM?dNTP；

（5）試劑E為4×Enzyme?mix，其組成為：1.5?M山梨醇,?0.42?mg/ml?BSA,?16?U/ml?RNase?H,?6400?U/ml?T7?RNA?Polymerase,?1280?U/ml?RT-M-MLV,?4000?U/ml?RNA?inhibitor；

（6）試劑F為RNA變性劑，其組成為：1.5?M?NaCl，0.15?M二水檸檬酸三鈉，pH?7.0,?0.15?M?甲醛；

（7）試劑G為雜交液，其組成為：1%?Blocking?Reagent?II，0.75?M?NaCl，0.075二水檸檬酸三鈉，50?μg/mlml?鮭精DNA；

（8）試劑H為地高辛標(biāo)（DIG）標(biāo)記探針，2?ng/μl，探針序列：?5’-GCACGGCATACCTTCTAAGAG-3’；

（9）試劑I為Buffer?II，其組成為：1%?Blocking?Reagent?II,?0.1?M?Tris,?0.15?NaCl,?pH?7.5；

（10）試劑J為堿性磷酸酶標(biāo)記的DIG抗體(AP-抗DIG)；

（11）試劑K為顯色劑，其組成為2.81%?NBT，2.19%?BCIP，70%二甲基甲酰胺；

（12）對照模板：

（12.1）陽性對照檢測樣品：東海原甲藻的總RNA；

（12.2）陰性對照檢測樣品：赤潮異灣藻的總RNA。