[發明專利]用于克隆和操作基因組的方法

有效

• 申請號: 201310011289.2
• 申請日: 2010-03-05
• 公開（公告）號: CN105274004B
• 公開（公告）日: 2019-08-09
• 發明（設計）人: 格威內德·A·本德斯;J·I·格拉斯;C·A·胡赤森;卡羅爾·拉蒂格;桑杰伊·瓦希;M·A·奧吉拉;漢密爾頓·O·史密斯;C·E·瑪麗曼;V·N·諾斯寇夫;R-Y·闖;D·G·吉布森;J·C·文特爾
• 申請（專利權）人: 合成基因組股份有限公司
• 主分類號: C12N1/13
• 分類號: C12N1/13;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N5/10;C12N15/63
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 趙蓉民;張全信

1.用于制造自我復制的合成細胞的方法，所述方法包括：

(i)裝配合成的細菌、藍細菌或微藻供體基因組為一條或多條片段，并且將作為一條或多條片段的所述供體基因組和宿主載體引入酵母宿主細胞，其中所述供體基因組和所述宿主載體在引入所述酵母宿主細胞之前或之后連接；

(ii)從所述酵母宿主細胞回收所述裝配的供體基因組；

(iii)進行步驟a)或b)或c)，其中a)、b)和c)分別為

a)通過甲基化所述供體基因組制備所述供體基因組，用于移植入細菌、藍細菌或微藻受體細胞；

b)通過除去或失活在受體細胞中存在的切割所述供體基因組的限制性內切酶功能，制備細菌、藍細菌或微藻受體細胞；

c)提供缺少切割所述供體基因組的限制性內切酶功能的細菌、藍細菌或微藻受體細胞；和

(iv)將所述回收的供體基因組引入所述受體細胞，

從而生成包括所述供體基因組并僅由所述供體基因組控制的自我復制的合成細胞，其中所述供體基因組足夠維持所述受體細胞的生存和連續的自我復制；和

其中所述合成細胞支持所述供體基因組的基因表達，并且具有所述供體基因組的表型，

其中所述供體基因組是長度大于300kb的完整的最小基因組。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述供體基因組和所述宿主載體同時引入所述宿主細胞。

3.根據權利要求1所述的方法，其中所述供體基因組和宿主載體在引入所述酵母宿主細胞之前通過將所述酵母宿主載體轉化入包含所述供體基因組的供體細胞而連接。

4.根據權利要求1所述的方法，進一步包括將第二供體基因組引入所述宿主細胞，其中所述第二供體基因組不同于所述供體基因組，從而產生包含兩種不同供體基因組的宿主細胞。

5.根據權利要求1所述的方法，其中在所述酵母宿主細胞內修飾所述供體基因組。

6.根據權利要求5所述的方法，其中所述修飾選自：替換、缺失、插入、重排、重組和其組合。

7.根據權利要求6所述的方法，其中所述修飾選自插入、缺失和替換。

8.根據權利要求6所述的方法，其中所述修飾是同源重組。

9.根據權利要求1-6中任一項所述的方法，其中所述供體基因組是藍細菌基因組且所述受體細胞是藍細菌細胞。

10.根據權利要求1-6中任一項所述的方法，其中所述供體基因組是微藻基因組且所述受體細胞是微藻細胞。

11.根據權利要求6所述的方法，其中所述酵母宿主細胞是釀酒酵母或粟酒裂殖酵母。

12.根據權利要求6所述的方法，其中所述酵母宿主細胞是釀酒酵母。

13.根據權利要求1-6或11-12中任一項所述的方法，其中所述供體基因組是細菌基因組且所述受體細胞是細菌細胞。

14.根據權利要求1-6或11-12中任一項所述的方法，其中所述供體基因組是支原體基因組且所述受體細胞是支原體細胞。

15.根據權利要求14所述的方法，其中所述供體基因組是蕈狀支原體基因組。

16.根據權利要求15所述的方法，其中所述受體細胞是山羊支原體。