[發明專利]淋球菌NG檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201310009076.6
• 申請日: 2013-01-10
• 公開（公告）號: CN103060453A
• 公開（公告）日: 2013-04-24
• 發明（設計）人: 戴立忠;鄧中平;李勃
• 申請（專利權）人: 湖南圣湘生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/06;G01N21/64
• 代理公司: 北京聿宏知識產權代理有限公司 11372
• 代理人: 吳大建;歐穎

技術領域

本發明提供一種淋球菌（NG）檢測試劑盒，具體是一種基于熒光PCR的NG-DNA檢測試劑盒。

背景技術

奈瑟淋球菌（Neisseria?gonorrheae，NG）1879年由Neisser發現，俗稱淋病雙球菌或淋球菌，是引起人類淋病的致病病原體，屬奈瑟菌屬。淋球菌（NG）有嚴格的人類寄生性，對人體有較強的適應和侵襲能力，其主要致病物質包括菌毛、外膜蛋白、蛋白酶、脂多糖等，是發展中國家發病率較高的性傳播疾病之一。NG主要通過性接觸直接感染，也可以通過接觸患者的衣物或馬桶等間接感染，還可以通過產道感染分娩時的胎兒。

淋病是世界上發病人數較多的性病之一，估計每年世界的患病人數大約有1億；在美國，據保守的估計，每年至少發生100萬例患者。我國在解放后不久淋病基本消滅，但是從1977年起淋病死灰復燃，并迅速蔓延到全國各地，在短短的幾年時間里報告病例數迅速攀升，至九十年代中期達到高峰，此后其發病水平開始緩慢回落，但仍然維持在較高水平。近年來，淋病的發病水平又呈上升的勢頭，在性傳播疾病中位居前列。

由NG感染引起的疾病是性傳播疾病中的一種重要疾病，由于NG感染者臨床癥狀不典型，如何快速、準確的進行檢測，對疾病的診斷、治療和控制等有著十分重要的意義。

目前淋球菌的實驗室診斷方法主要有分離培養法、涂片鏡檢法、免疫學方法、基于PCR技術的檢測方法等。分離培養法的操作簡單，特異性較高，被認為是診斷淋球菌的“金標準”，但是培養耗時比較長，同時敏感性較低，可能因病原微生物的量過少，或接種后病原微生物不成活而延誤病情。涂片鏡檢法簡便易行，價格低廉，但其特異性受取材、涂片、染色等各種因素的影響，且鏡下淋病雙球菌極易與其他的革蘭氏陰性雙球菌混淆，易發生誤診和漏診。免疫學方法主要包括酶聯吸附試驗和免疫膠體金技術，操作簡單且靈敏性優于培養法。近年來，聚核酶鏈式反應(PCR)法漸漸顯現了其在檢測上的優勢，熒光PCR技術是基于傳統PCR技術并結合光譜技術而發展起來的一種更靈敏，更特異，更精確的核酸檢測技術。檢測結果準確，重復性高，能動態反應患者治療前、后病原體動態變化及與臨床的關系，且整個過程中避免了傳統PCR需后處理的問題，減少了污染。

定量PCR的出現，打破PCR只能定性的局面，其中熒光定量PCR以其高靈敏度、高特異性、低污染率、實時監測等特點，可為臨床提供更加準確、客觀的檢測結果，并及時地了解病情及預后。

運用PCR技術進行檢測主要涉及到兩個方面，核酸的提取和核酸的擴增檢測。

目前國內臨床上主要采用煮沸法對淋球菌的核酸進行提取，具體是先將分泌物樣本濃縮、洗滌，再加裂解液，煮沸，高速離心，取上清為模板；該方法核酸提取過程較復雜，樣本處理耗時長，且在處理樣本時，經過煮沸裂解、高速離心富集DNA等多個步驟，樣本中的DNA存在損耗，尤其對于高濃度的樣本，裂解不充分、富集不完全，會造成DNA的大量丟失導致樣本定量偏低，同時由于采用了水浴或金屬浴的高溫加熱步驟，容易造成氣溶膠污；另外，對于濃縮這一步，不同廠家的濃縮效果不一樣，有的可以看到沉淀，有的無法看到，能看到沉淀是因為該步驟將核酸與蛋白都濃縮了，這樣會導致后面加入裂解液時很難充分混勻；無法看到沉淀的則使操作者無法確定吸棄上清時會不會吹打到核酸。