[發明專利]低危型人乳頭瘤病毒HPV6/11檢測試劑盒

無效

• 申請號: 201310009074.7
• 申請日: 2013-01-10
• 公開（公告）號: CN103173565A
• 公開（公告）日: 2013-06-26
• 發明（設計）人: 戴立忠;劉佳;熊曉燕
• 申請（專利權）人: 湖南圣湘生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93
• 代理公司: 北京聿宏知識產權代理有限公司 11372
• 代理人: 吳大建;歐穎

技術領域

本發明提供一種低危型人乳頭瘤病毒HPV6/11檢測試劑盒，具體是一種基于熒光PCR的HPV6/11-DNA檢測試劑盒。

背景技術

人乳頭瘤病毒（Human?papillomavirus，HPV）是一類分子量較小的無包膜的雙鏈環狀DNA病毒，專性侵染和寄生人體生殖器官及其它組織器官的上皮細胞。在臨床上，根據HPV不同亞型的致病力大小或致癌危險性大小可將HPV分為高危型和低危型兩大類。低危型HPV主要引起肛門皮膚及男性外生殖器、女性大小陰唇、尿道口、陰道下段的外生性疣類病變和低度子宮頸上皮內瘤，其病毒亞型主要有HPV6、11、40、42、43和44型。尖銳濕疣（Genital?warts，Condylomata?acumlnata，CA）又名性疣，肛門生殖器疣，是由某些特定類型的HPV感染所引起的男女生殖器、會陰和肛門部位的表皮瘤樣增生，多發生于青壯年男女。本病流行于全世界，是目前歐美及非洲國家最常見的性傳播疾病之一。CA在我國的發病率較高，近年又迅速增加，成為僅次于淋病的第二大性病。在近百種HPV亞型中有30余種與尖銳濕疣相關，其中HPV6型和HPV11型又是被確認引起尖銳濕疣的主要亞型，有學者稱之為經典亞型。因此，快速、準確的檢測出HPV6型和11型對于尖銳濕疣的輔助診斷、早期治療和預防其流行等具有重要的意義。

目前低危型人乳頭瘤病毒的實驗室診斷方法主要有細胞學檢查、病理學檢查、免疫組化檢測、分子生物學技術等。細胞學檢查是群體篩查的常規手段，但受取材、涂片制作質量、閱片技術影響，準確性低，重復性差，敏感性也有限。病理學檢查對形態學表現不典型者特異性較差。免疫組化是通過檢測HPV的衣殼抗原來進一步明確HPV感染，其所得陽性反應定位明確，判斷可靠；但是必須在HPV?DNA復制成熟后才有衣殼裝備；陰性者也不能否定診斷，且該方法敏感性較低。近年來，分子生物學技術漸漸顯現了其在檢測上的優勢，目前認為PCR技術是檢測HPV?DNA及分型的最好方法。熒光PCR技術是基于傳統PCR技術并結合光譜技術而發展起來的一種更靈敏，更特異，更精確的核酸檢測技術。檢測結果準確，重復性高，能動態反應患者治療前、后病原體動態變化及與臨床的關系，且整個過程中避免了傳統PCR需后處理的問題，減少了污染。大量研究表明用PCR技術檢測HPV?DNA的陽性率遠高于其他檢測技術，是當今用于尖銳濕疣以及HPV感染診斷最常用的有力工具，且能更好的應用于HPV致病、致癌機理的研究之中。運用PCR技術進行檢測主要涉及到兩個方面，核酸的提取和核酸的擴增檢測。

目前國內臨床上主要采用煮沸法對人乳頭瘤病毒的核酸進行提取，具體是先將分泌物樣本濃縮、洗滌，再加裂解液，煮沸，高速離心，取上清為模板。該方法核酸提取過程較復雜，樣本處理耗時長，且在處理樣本時經過煮沸裂解、高速離心富集DNA等多個步驟，樣本中的DNA存在損耗，尤其對高濃度的樣本裂解不充分、富集不完全，會造成DNA的大量丟失導致樣本定量偏低，同時由于采用了水浴或金屬浴的高溫加熱步驟，容易造成氣溶膠污染；另外，對于濃縮這一步，不同廠家的濃縮效果不一樣，有的可以看到沉淀，有的無法看到；看得到沉淀的是因為將病毒與蛋白都濃縮了，這樣導致后面加入裂解液時很難充分混勻；無法看到沉淀的則會使操作者無法確定吸棄上清時會不會吹打到病毒核酸。