[發明專利]一種檢測多巴胺的電極的制備方法

有效

• 申請號: 201310007432.0
• 申請日: 2013-01-09
• 公開（公告）號: CN103913495A
• 公開（公告）日: 2014-07-09
• 發明（設計）人: 華祖林;白雪;秦琴;徐露竹;顧莉;褚克堅;程浩淼
• 申請（專利權）人: 河海大學
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 李紀昌

技術領域

本發明屬于生化分析領域，涉及一種檢測多巴胺的快速電極的制備方法。

背景技術

多巴胺(DA)是存在于中樞神經系統的一類重要的神經傳遞素,?它能調節腦內相關中樞神經系統的多種功能及精神活動，如感知、情感、行為和運動等。體內DA失調將會導致精神分裂癥以及帕金森氏綜合癥等疾病。因此，對其含量測定在生理功能研究和臨床應用方面都具有重要的意義。

近年來，不同類型檢測DA的方法和應用成為研究熱點。國內外常采用的檢測DA的方法包括高效液相色譜法，紫外-可見分光光度法，熒光分光光度法，毛細管電泳法，電化學方法等。但現有的這些檢測方法不同程度的存在分析速度慢，檢測結果不穩定，操作工藝復雜，成本較高等問題。

事實上，由于抗壞血酸（AA）、多巴胺前軀體及代謝產物的存在，使得DA的檢測成為一大難題。傳統的檢測方法無法排除這些物質的干擾，電化學方法作為一種新興的檢測手段，能夠有效的排除AA、尿酸（UA）等物質的干擾，在一定的濃度范圍內選擇性的檢測出DA。目前，科研工作者已經研究出一系列選擇性檢測DA的電化學方法。如石墨烯修飾玻碳電極，在保持AA濃度始終為1mM的情況下，能夠檢測出DA濃度的線性范圍是4μM-100μM，檢測限是2.64μM（Kim,?Y.-R.,?S.?Bong,?et?al.?Electrochemical?detection?of?dopamine?in?the?presence?of?ascorbic?acid?using?graphene?modified?electrodes.?Biosensors?and?Bioelectronics.?2010.25(10):?2366-2369.）；漆酶/多壁碳納米管修飾玻碳電極，在生理水平的AA和3,4-二羥基苯乙酸（DOPAC）干擾下，該電極檢測DA的線性范圍是1-30μM，檢測限是0.4μM(Xiang,?L.,?Y.?Lin,?et?al.?Laccase-catalyzed?oxidation?and?intramolecular?cyclization?of?dopamine:?A?new?method?for?selective?determination?of?dopamine?with?laccase/carbon?nanotube-based?electrochemical?biosensors.?Electrochimica?Acta.?2007.52(12):?4144-4152)；二茂鐵/多壁碳納米管修飾玻碳電極，在AA濃度高達10mM情況下，檢測DA的線性范圍是0.5μM-20μM，檢測限是0.3μM(Cheng,?H.,?H.?Qiu,?et?al.?Investigation?of?the?electrochemical?behavior?of?dopamine?at?electrodes?modified?with?ferrocene-filled?double-walled?carbon?nanotubes.?Electrochimica?Acta.?2012.?63:?83-88.)。這些電極均能在特定濃度的干擾物存在下，較靈敏的選擇性檢測出DA。但這些電化學檢測DA方法使用的電極多為玻碳電極，玻碳電極價格相對昂貴且需要經過復雜的預處理活化步驟，使得電極的制備非常復雜。

發明內容

本發明的目的是提供一種檢測DA的電極的制備方法。本發明用成本低廉的絲網印刷電極（SPE）為載體，修飾上還原氧化石墨烯(rGO)、β-環糊精(β-CD)和葡萄糖氧化酶(GOx)，得到修飾電極SPE/rGO/β-CD/GOx，實現了快速有效的檢測DA的目的。該電極具有成本低、操作簡便、快速、靈敏、選擇性好等優點。

本發明提供一種檢測多巴胺的電極的制備方法，該方法包括如下步驟：

（1）將rGO加入無水乙醇中，超聲分散0.5～8h得到rGO懸浮液，所述rGO懸浮液濃度為100～2000mg?/L；

（2）移取rGO懸浮液并滴涂至活化處理后的SPE上，滴涂量為10～30μL，制得SPE/rGO；

（3）將β-CD和GOx溶解于pH值為6.2～8.0的PBS緩沖液中，每1mL的PBS緩沖液中溶有0.005～0.025g的β-CD和活力為500～5000U的GOx；再使用SPE/rGO掃描該混合溶液，掃描的電位范圍為-0.2～0.8V，得到SPE/rGO/β-CD/GOx電極。

步驟（1）所述rGO懸浮液濃度為1000mg/L。