[發(fā)明專利]一種重組抑制素疫苗及其制備方法和應(yīng)用

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310007263.0
• 申請(qǐng)日: 2013-01-09
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103041381A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-04-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 施振旦;孫愛(ài)東;李輝
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號(hào): A61K39/00
• 分類號(hào): A61K39/00;A61K9/107;A61P15/08
• 代理公司: 江蘇圣典律師事務(wù)所 32237
• 代理人: 孫忠浩

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種抑制素疫苗及其制備方法和應(yīng)用，涉及一種促進(jìn)家畜發(fā)情及提高家畜繁殖力疫苗及其制備方法和應(yīng)用，屬于動(dòng)物繁殖學(xué)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

家畜繁殖力的高低直接影響到養(yǎng)殖和畜牧業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益。部分家畜受到夏季高溫應(yīng)激、泌乳、舍飼環(huán)境、季節(jié)及管理等因素的影響，導(dǎo)致下丘腦-垂體-性腺調(diào)節(jié)軸的調(diào)節(jié)機(jī)能紊亂，使垂體不能分泌足夠的促性腺激素以促進(jìn)卵泡發(fā)育成熟并排卵，致使卵巢處于相對(duì)靜止?fàn)顟B(tài)，而使得其表現(xiàn)為乏情而導(dǎo)致繁殖性能的下降。目前，在實(shí)際生產(chǎn)中，多采用外源激素（如促性腺激素、雌激素和前列腺素等）進(jìn)行處理，以促進(jìn)母畜卵泡發(fā)育并表現(xiàn)發(fā)情，然后進(jìn)行配種使之完成繁殖活動(dòng)。然而以上三種應(yīng)用較廣泛的激素，其作用機(jī)制較簡(jiǎn)單或作用環(huán)節(jié)較少，如促性腺類激素只能影響卵泡發(fā)育并且因?yàn)榘胨テ诙潭掷m(xù)時(shí)間較短而對(duì)動(dòng)物受胎率的提高或保持較少，雌激素和前列腺素類則幾無(wú)促進(jìn)繁殖活動(dòng)的功能。因此，動(dòng)物繁殖研究人員在不斷進(jìn)行研究以開(kāi)發(fā)新穎生殖調(diào)控新技術(shù)和新產(chǎn)品，希望以較為簡(jiǎn)單的程序很好地促進(jìn)性腺活動(dòng)、發(fā)情、配種、胚胎發(fā)育、生殖道發(fā)育使胚胎著床受胎，從而提高動(dòng)物的繁殖性能。

大量研究表明，母畜的卵泡發(fā)育是由促性腺激素促進(jìn)的，同時(shí)也受到但一些局部調(diào)節(jié)因子的影響。例如，抑制素（INH）-活化素（ACT）-卵泡抑素（FS）系統(tǒng)是參與卵泡發(fā)育調(diào)節(jié)的重要的卵巢內(nèi)局部調(diào)控因子。排卵前期優(yōu)勢(shì)卵泡分泌的大量抑制素（INH）通過(guò)負(fù)反饋機(jī)制抑制垂體FSH的分泌，抑制素和卵泡抑素同時(shí)也具有直接抑制小卵泡或后進(jìn)卵泡的發(fā)育。通過(guò)主動(dòng)或被動(dòng)免疫抑制素中和內(nèi)源性抑制素的生物活性，則可以一方面促進(jìn)FSH的分泌，另一方面又去除抑制素對(duì)發(fā)育中卵泡的抑制或損害。

因此，之前人們的研究發(fā)現(xiàn)，主動(dòng)免疫抑制素后，通過(guò)促進(jìn)卵泡發(fā)育促進(jìn)卵泡分泌更多雌二醇（E2），從而使母畜發(fā)情表現(xiàn)更為旺盛，發(fā)育良好的卵泡在排卵后轉(zhuǎn)化為高質(zhì)量的黃體并分泌高水平的孕酮(P4)。發(fā)情時(shí)主水平的E2影響雌性生殖道內(nèi)環(huán)境，有助于精子的運(yùn)行和精卵的結(jié)合。排卵后黃體發(fā)育分泌的孕酮，則進(jìn)一步通過(guò)對(duì)子宮內(nèi)分泌環(huán)境的影響，促進(jìn)胚胎的發(fā)育。而且，我們的研究還發(fā)現(xiàn)，抗抑制素抗體能夠促進(jìn)體外成熟的卵子使之在受精之后發(fā)育為質(zhì)量更高的胚胎。而以上各方面事件，都有助于提高動(dòng)物配種的受胎率，也即提高動(dòng)物的繁殖性能。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于，提供一種能夠促進(jìn)雌性家畜發(fā)情及提高家畜繁殖力的重組抑制素疫苗及其制備方法和應(yīng)用。

本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的：一種重組抑制素疫苗，其特征在于：它是由油相制劑和水相制劑按照2:1的體積比混合而成的油乳劑，油相制劑由司本80、司本85和10號(hào)礦物油組成，其中含4％的司本80、2％的司本85；水相制劑由滅菌吐溫80、重組抑制素α亞基蛋白和滅菌水組成，所述的重組抑制素α亞基蛋白由表達(dá)載體pREST-INH，經(jīng)大腸桿菌表達(dá)菌株BL21(DE3)表達(dá)并純化后獲得，水相制劑中含4％的滅菌吐溫80。

在本發(fā)明中：疫苗中重組抑制素α亞基蛋白的含量為2mg/mL或1mg/mL或0.5mg/mL或0.25mg/mL。

一種上述重組抑制素疫苗的制備方法，其特征在于：

a)?4％的司本80、2％的司本85與10號(hào)礦物油勻漿機(jī)上3000rpm混合20分鐘，121℃條件下高壓滅菌，獲得油相制劑，備用；

b)由表達(dá)載體pREST-INH，經(jīng)大腸桿菌表達(dá)菌株BL21(DE3)表達(dá)并純化獲得重組抑制素α亞基蛋白，將吐溫80在121℃條件下滅菌15分鐘，取無(wú)菌蒸餾水、滅菌后的吐溫80以及重組抑制素α亞基蛋白在勻漿機(jī)上3000rpm,?20分鐘混勻后形成水相制劑，備用；水相制劑中重組抑制素α亞基蛋白的含量為0.5~10mg/mL?，滅菌吐溫80的含量為4％；

c)?將備用的油相制劑和備用的水相制劑按照2:1的體積比混合，具體步驟是：先將油相制劑置于勻漿機(jī)3000rpm中混勻，混勻過(guò)程中逐步加入備用的水相制劑，待全部水相制劑加入后繼續(xù)混勻20分鐘；獲得重組抑制素疫苗，該疫苗中重組抑制素α亞基蛋白的含量為2mg/mL或1mg/mL或0.5mg/mL或0.25mg/mL。

一種上述重組抑制素疫苗的應(yīng)用，其特征在于：對(duì)雌性家畜肌肉注射后，通過(guò)重組抑制素α亞基蛋白的免疫提高家畜繁殖力。

在所述重組抑制素疫苗的應(yīng)用中：所述的雌性家畜為母豬或母羊或母水牛。