[發明專利]一種不同乙酰度的N-乙酰化殼六糖的分離純化方法

有效

• 申請號: 201310006368.4
• 申請日: 2013-01-08
• 公開（公告）號: CN103613684A
• 公開（公告）日: 2014-03-05
• 發明（設計）人: 李鵬程;李克成;邢榮娥;劉松;于華華;秦玉坤
• 申請（專利權）人: 中國科學院海洋研究所
• 主分類號: C08B37/08
• 分類號: C08B37/08
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 周秀梅;李穎

1.一種不同乙酰度的N-乙酰化殼六糖的分離純化方法，其特征在于：將全脫乙酰化殼六糖進行乙酰化后得到N-乙酰化殼六糖混合物，所得N-乙酰化殼六糖混合物溶解后用離子交換色譜柱以含0-2M濃度的NaCl的緩沖溶液，在pH3-6，2-5mLmin^-1流速下進行分離純化，以糖含量收集含有寡糖的不同組分的洗脫液，將不同組分的洗脫液分別經活性碳萃取脫鹽后濃縮，即得到N-乙酰化殼六糖、N，N’-二乙酰化殼六糖、N，N’，N”-三乙酰化殼六糖、N，N’，N”，N”’-四乙酰化殼六糖、N，N’，N”，N”’，N””-五乙酰化殼六糖、N，N’，N”，N”’，N””，N””’-六乙酰化殼六糖。

2.按權利要求1所述的不同乙酰度的N-乙酰化殼六糖的分離純化方法，其特征在于：所述離子交換色譜柱為CM?Sephadex?C-25或CM?Sepharose?Fast?Flow。

3.按權利要求1所述的不同乙酰度的N-乙酰化殼六糖的分離純化方法，其特征在于：所述N-乙酰化殼六糖、N，N’-二乙酰化殼六糖、N，N’，N”-三乙酰化殼六糖、N，N’，N”，N”’-四乙酰化殼六糖、N，N’，N’’，N’’’，N’’’’-五乙酰化殼六糖、N，N’，N”，N”’，N””，N””’-六乙酰化殼六糖可能存在不同序列排布的同分異構體，以A和D分別代表N-乙酰氨基葡萄糖和氨基葡萄糖，結構式如下所示：

N-乙酰氨基葡萄糖（A）：

氨基葡萄糖（D）：

六種N-乙酰化殼六糖糖鏈以β-1，4糖苷鍵連接，其結構序列如下所示：

N-乙酰殼六糖：

ADDDDD、DADDDD、DDADDD、DDDADD、DDDDAD或DDDDDA；

N，N’-二乙酰化殼六糖：

AADDDD、ADADDD、ADDADD、ADDDAD、ADDDDA、DAADDD、DADADD、DADDAD、DADDDA、DDAADD、DDADAD、DDADDA、DDDAAD、DDDADA或DDDDAA；

N，N’，N”-三乙酰化殼六糖：

AAADDD、AADADD、AADDAD、AADDDA、ADAADD、ADADAD、ADADDA、ADDAAD、ADDADA、ADDDAA、DDDAAA、DDADAA、DDAADA、DDAAAD、DADDAA、DADADA、DADAAD、DAADDA、DAADAD或DAAADD；

N，N’，N”，N”’-四乙酰化殼六糖：

DDAAAA、DADAAA、DAADAA、DAAADA、DAAAAD、ADDAAA、ADADAA、ADAADA、ADAAAD、AADDAA、AADADA、AADAAD、AAADDA、AAADAD或AAAADD；

N，N’，N”，N”’，N””-五乙酰化殼六糖：

DAAAAA、ADAAAA、AADAAA、AAADAA、AAAADA或AAAAAD；

N，N’，N”，N”’，N””，N””’-六乙酰化殼六糖:

AAAAAA。

4.按權利要求1所述的不同乙酰度的N-乙酰化殼六糖的分離純化方法，其特征在于：所述將全脫乙酰化殼六糖進行乙酰化后得到N-乙酰化殼六糖混合物具體為：將全脫乙酰化殼六糖加入到過量的甲醇與水（甲醇與水按體積比1:1的比例混合）混合液中，混勻后再加入乙酸酐在室溫下反應15-240min，反應后收集反應液冷凍干燥得到固體N-乙酰化殼六糖混合物，待用；其中，全脫乙酰化殼六糖與乙酸酐的質量體積比為1:0.1-1.5。

5.按權利要求1或4所述的不同乙酰度的N-乙酰化殼六糖的分離純化方法，其特征在于：所述N-乙酰化殼六糖混合物于pH=3-6的酸性溶液中溶解，用孔徑為0.45μm的微孔濾膜過濾，待用。