[發(fā)明專利]一種葉下珠多糖組份的提取分離方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310005701.X
• 申請(qǐng)日: 2013-01-08
• 公開（公告）號(hào): CN103059157A
• 公開（公告）日: 2013-04-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李清祿;李宇翔;李凌峰;張麗麗;謝勇平;曹高娟;黃志堅(jiān)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 福建農(nóng)林大學(xué)
• 主分類號(hào): C08B37/00
• 分類號(hào): C08B37/00;A61P31/20
• 代理公司: 福州元?jiǎng)?chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學(xué)俊

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明一種涉及葉下珠多糖組份PUIPⅡ的提取分離方法。?

背景技術(shù)

葉下珠(Phyllanthus?urinaria?L.)，又名珍珠草、夜合草、陰陽(yáng)草，屬于大戟科(?Euphorbi?aceae)葉下珠屬植物葉下珠的干燥全草，在民間廣泛用于利水解毒、平肝清熱。1988年，印度學(xué)者Thyagarajan等人首次通過實(shí)驗(yàn)證明苦味葉下珠可以使59%患者的乙肝表面抗原(HBsAg)轉(zhuǎn)陰，這一實(shí)驗(yàn)結(jié)果引起了國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)葉下珠的關(guān)注。大量研究表明^]葉下珠具有抗乙肝病毒、保肝降酶、抗肝纖維化、防止肝損傷和抗癌變的效果，且毒副作用低，是一種值得深入開發(fā)的治療乙型肝炎的天然藥材。?

葉下珠中含有多種化學(xué)成分，文獻(xiàn)已經(jīng)報(bào)道過的有木脂素、萜類、黃酮、糅質(zhì)、生物堿等，包括正十八烷、去氫訶子次酸、阿魏酸、沒食子酸、短葉蘇木酚酸、丁二酸、甲氧基糅花酸、山茶素、老鶴草素、短葉蘇木酸甲脂、短葉蘇術(shù)酚酸乙脂、柯里拉京、去氫訶子次酸三甲脂、多糖等等。?

多糖類化合物具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗病毒、抗氧化、抗炎、抗消化性潰瘍、抗凝血、降血糖、降血脂、抗輻射、抗血栓、抗水腫、抗毒物損傷等多種生物活性。?

乙型病毒性肝炎（HBV）是全球性的公共衛(wèi)生問題，根據(jù)全球衛(wèi)生組織(WHO）數(shù)據(jù)，全世界有3.5～4.0億乙肝病毒感染者，其中每年有近100萬患者死于HBV?感染引起的肝功能衰竭、肝硬化和肝癌。目前應(yīng)用于乙型肝炎治療的藥物主要是干擾素和核苷類似物，然而這些藥物只能獲得某種程度上的治療效果。?

在尋找乙肝治療藥物的過程中，中藥多糖成分越來越受到人們的重視。葉下珠具有抗乙肝病毒，保肝，抗腫瘤等功效已得到普遍證實(shí)，并且相關(guān)學(xué)者也對(duì)其中的幾種化學(xué)成分，如沒食子酸、黃酮類及葉下珠素等做了結(jié)構(gòu)和生物活性的研究，但對(duì)其中的多糖研究卻很少。開展對(duì)葉下珠中多糖成分的提取分離，結(jié)構(gòu)鑒定及生物活性的檢測(cè)，有利于進(jìn)一步確定葉下珠用于治療乙型肝炎的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，更好地開發(fā)葉下珠這一藥用植物資源，為尋找乙肝治療新藥打下理論基礎(chǔ)。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種葉下珠多糖組份PUIPⅡ的提取分離方法。?

本發(fā)明所述的葉下珠多糖組份PUIPⅡ的提取分離方法，包括如下步驟：?

1）葉下珠全草用蒸餾水洗凈，干燥后粉碎，用石油醚脫脂，乙醇脫小分子糖后，藥渣用水浸提，浸提液離心分離，取清液濃縮后加入乙醇醇沉，醇沉物即為粗總多糖；粗總多糖經(jīng)2）除蛋白，3）醇沉、洗滌和4）透析、干燥即得葉下珠精總多糖；5）多糖各組分分離純化：葉下珠精總多糖過離子交換柱，用NaCl溶液梯度洗脫，苯酚－硫酸法跟蹤檢測(cè)，繪制洗脫曲線，洗脫曲線上依次出現(xiàn)四個(gè)峰，分別代表四個(gè)多糖組分，按照出峰的順序分別記為PULPⅠ、PULPⅡ、PULPⅢ和PULPⅣ，收集第2主峰組分，濃縮，重蒸水透析，冷凍干燥得葉下珠多糖PULPⅡ純組分。

步驟1）粉碎的葉下珠全草粉末，用石油醚在70～90℃下回流提取2～4次，每次1～3小時(shí)，棄去回流液，藥渣繼續(xù)用50～100%乙醇在80～95℃下回流提取2～4次，每次1～3小時(shí)，棄去回流液，得到的藥渣再用60～95?℃水浸提3次，每次1～3小時(shí)，合并3次浸提液進(jìn)行離心分離，離心速度2000～6000r/min，取清液濃縮至原體積1/4，加入4倍體積的90～100%乙醇，靜置24h，離心，取醇沉物即為粗多糖。?

步驟2）所述除蛋白采用Sevag法脫蛋白：將步驟1）得到的醇沉物用蒸餾水復(fù)溶得粗多糖溶液，在粗多糖溶液中加入氯仿和正丁醇混合液，粗多糖溶液：氯仿和正丁醇混合液體積為1～6：1～3，所述氯仿和正丁醇混合液中氯仿：正丁醇體積比=1～4:1～4，攪拌，充分靜置分層，棄去沉淀，重復(fù)1～10次后直至界面無白色沉淀。?

步驟3）所述醇沉、洗滌：在除蛋白后的多糖溶液中加入3～6倍體積的75～100%乙醇，靜置12～36h，離心，沉淀依次用無水乙醇、丙酮、乙醚清洗，重復(fù)2～5次。?

步驟4）所述透析、干燥：取醇沉、洗滌后的多糖加入蒸餾水，充分復(fù)溶后用蒸餾水透析，透析在磁力攪拌下進(jìn)行，樣品液與蒸餾水體積比為1:10～30，4～8h換一次水，透析12～120h，透析完畢后將糖溶液放入冷凍干燥機(jī)中干燥得葉下珠精總多糖，多糖含量在95%以上。?

步驟5）的離子交換柱采用DEAE-52陰離子交換樹脂。?