[發明專利]抑制丙型肝炎病毒侵染細胞的多肽及其應用

有效

• 申請號: 201310005003.X
• 申請日: 2011-09-27
• 公開（公告）號: CN103059102A
• 公開（公告）日: 2013-04-24
• 發明（設計）人: 呂欣;尹文;張芳琳;李玉成;姚敏;賈戰生;黃小軍;張建敏;雷迎峰;楊敬;蘭海云
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第四軍醫大學
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;A61K38/08;A61P31/14
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 汪人和

技術領域

本發明屬于預防HCV感染的技術領域，涉及抑制丙型肝炎病毒侵染細胞的多肽及其應用。

背景技術

HCV（丙型肝炎病毒）為黃病毒屬，單股正鏈RNA病毒，由結構蛋白（Core、E1、E2）和非結構蛋白（NS2～NS5B）組成。HCV是丙型肝炎的病原體，急性感染后約75％發展為慢性肝炎，其中約20％結局為肝硬化或肝功能衰竭，并有可能進一步發展為肝癌。目前全世界有1.7億感染者，我國約有4000萬，HCV感染已經成為全球性的社會公共衛生問題之一。

HCV因病毒自身的高變異性，給疫苗研究造成極大困難。現今對HCV感染的治療僅限于單獨使用干擾素（interferon,IFN），或者與廣譜抗病毒藥物利巴韋林（ribavirin）聯合用藥，但治療效果不佳，有一定的副作用，且不同型別對IFN反應性差別較大。多年來研究者一直在尋找防治感染的有效靶點，但還未得到特異有效的抑制劑，使用效果仍在實驗或臨床研究初步評估階段。

根據病毒與細胞相互作用的理論，病毒與宿主細胞膜表面受體的特異性結合是病毒感染的始動環節，型別不同的同種病毒在與細胞結合過程中作用分子一般是固定的，阻斷二者之間的結合，即可有效地抑制病毒性感染的發生。2003年美國FDA批準抗人免疫缺陷病毒（HIV）的新藥T-20（又名Enfuvirtide或Fuzeon）上市，T-20是穿入抑制劑中第一個上市的藥物，含有36Aa，能夠與HIV包膜糖蛋白gp41結合，阻止病毒與靶細胞的融合，臨床試驗證明效果較好，受試者副反應較小（Cervia?JS,et?al.Enfuvirtide(T-20):a?novel?human?immunodeficiency?virus?type?1?fusion?inhibitor.Clin?Infect?Dis.2003;37(8):1102-6）。

目前已經確證HCV包膜糖蛋白E1-E2是與宿主細胞受體結合的唯一關鍵性分子，其中E2被認為是最重要的分子。1998年Pileri等的研究表明人CD81（hCD81）可能是HCV的受體（Pileri,P.et?al.Binding?of?hepatitis?C?virus?to?CD81.Science.1998;282:938-941）。隨后低密度脂蛋白受體(LDLR)(Agnello?V，et?al.Hepatitis?C?virus?and?other?flaviviridae?viruses?enter?cells?via?low?density?lipoprotein?receptor.Proc?Natl?Acad?Sci?U?S?A.1999;96:12766-71)、清道夫受體B族Ⅰ型(SR-BI)（Scarselli?E,et?al.The?human?scavenger?receptor?class?B?type?I?is?a?novel?candidate?receptor?for?the?hepatitis?C?virus.EMBO?J.2002;21(19):5017-25）、鈣離子依賴型(C型)凝集素DC/L-SIGN（Pohlmann?S,et?al.Hepatitis?C?virus?glycoproteins?interact?with?DC-SIGN?and?DC-SIGNR.J?Virol.2003;77(7):4070-80）、Occludin（Ploss?A,et?al.Human?is?a?hepatitis?C?virus?entry?factor?required?for?infection?of?mouse?cells.Nature.2009;457:882-6）和細胞連接骨架蛋白Clauding-1（Evans?MJ,et?al.Claudin-1?is?a?hepatitis?C?virus?coreceptor?required?for?a?late?step?in?entry.Nature.2007;446:801-5）等都被證實是HCV的可能受體，目前比較一致的看法是HCV通過包膜糖蛋白E2與CD81特異性結合，使病毒吸附于宿主細胞表面，但由于CD81介導的內吞作用弱，病毒最終進入細胞可能還需其他分子，如LDLR、SR-BI等來輔助，Clauding-1則在病毒穿入過程的后期起到關鍵作用（Helle?F,et?al.Hepatitis?C?virus?entry?into?host?cells.Cell?Mol.2008;65:100-12）。不同研究小組利用噬菌體肽庫法篩選HCV的穿入抑制劑，結果顯示具有SPQYWTGPA基序的多肽可以競爭抑制HCV?E2與hCD81的結合（Cao?J,et?al，Phage?display?selection?on?whole?cells?yields?a?small?peptide?specific?for?HCV?receptor?human?CD81.Cell?Res.2003;13(6):473-9）、具有TSQNIRS基序的多肽可以抑制HCV侵染細胞（Hong?HW，et?al.Selection?of?Peptides?Binding?to?HCV?E2?and?Inhibiting?Viral?Infectivity.J?Microbiol?Biotechnol.2010;20:1769-71）,這些都顯示了以阻斷HCV與受體結合為基礎設計抗病毒藥物的可行性（Meanwell?NA.Hepatitis?C?virus?entry:an?intriguing?challenge?for?drug?discovery.Curr?Opin?Investigate?Drugs.2006;7(8):727-32.和Pawlotsky?JM,et?al.The?hepatitis?C?virus?life?cycle?as?a?target?for?new?antiviral?therapies.Gastroenterology.2007;132(5):1979-98）。