[發明專利]分泌表達抗菌肽Metchnikowin大腸桿菌基因工程菌的構建方法

無效

• 申請號: 201310004953.0
• 申請日: 2013-01-07
• 公開（公告）號: CN103088043A
• 公開（公告）日: 2013-05-08
• 發明（設計）人: 查向東;惲輝;余忠麗;程林春;趙大偉;耿玉靜
• 申請（專利權）人: 安徽希普生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 安徽匯樸律師事務所 34116
• 代理人: 胡敏

1.一種構建所述分泌表達抗菌肽Metchnikowin大腸桿菌基因工程菌的方法，其特征在于，包括將抗菌肽Metchnikowin基因連接，構建重組pET-22b質粒，轉化大腸桿菌BL21感受態細胞。

2.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述抗菌肽Metchnikowin基因含有核苷酸序列SEQ?ID?：NO?1、SEQ?ID?：NO2，含有氨基酸序列SEQ?ID?NO3：SEQ?ID?NO4。

3.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述抗菌肽Metchnikowin基因是通過擴增獲得的，以含有Metchnikowin基因序列的質粒為模板，在其下游設計EcoRI酶切位點，其引物為：

MF:5’-CATCGTCATCAGGGTCCG-3’;

MR:5’-GGAATTCTTAATAAATCGG?-3’。

4.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述抗菌肽Metchnikowin基因的擴增，以含有融合蛋白基因的質粒為模板，在序列上游設計Nco?I酶切位點，其引物：

CF:5’-CATGCCATGGATCACCATCATCATCAT-3’?;?

CR:?5’-AAGGGTTTCCGAAGGCTTGG-3’。

5.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述構建重組pET-22b質粒中，以所述擴增的融合蛋白基因與所述擴增的抗菌肽Metchnikowin基因磷酸化后用T4DNA連接酶連接。

根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述誘導表達：振蕩培養基因工程菌至對數期，加入誘導劑誘導24小時，培養溫度：25℃。