[發(fā)明專利]一種耐高溫耐乙醇生香酵母的馴化方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310004856.1
• 申請(qǐng)日: 2013-01-08
• 公開（公告）號(hào): CN103205368A
• 公開（公告）日: 2013-07-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 俞建午;李小兵;朱增亮;錢淑芳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江省致中和生物健康食品研究院
• 主分類號(hào): C12N1/18
• 分類號(hào): C12N1/18;C12N11/10;C12N11/04;C12R1/865
• 代理公司: 杭州杭誠專利事務(wù)所有限公司 33109
• 代理人: 王江成

1.?一種耐高溫耐乙醇生香酵母的馴化方法，其特征在于：所述的馴化方法步驟如下：

（1）、以總酯含量和聞香為指標(biāo)，同時(shí)兼顧酒精度，從市售的生香酵母中篩選得到生香優(yōu)良的酵母菌株；

（2）、將步驟（1）篩選得到生香優(yōu)良的酵母菌株接入麥芽汁培養(yǎng)基中培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期，獲得對(duì)數(shù)期生香酵母菌液，將對(duì)數(shù)期生香酵母菌液與海藻酸鈉水溶液在室溫?zé)o菌狀態(tài)下混合均勻，再將混合液加入到氯化鈣水溶液中制備成凝膠球顆粒，然后在2-4℃下固化4-5小時(shí)得固定化凝膠顆粒，用無菌水將固定化凝膠顆粒水洗后獲得固定化生香酵母；

（3）、對(duì)固定化生香酵母在乙醇馴化培養(yǎng)基中進(jìn)行耐高溫耐乙醇的循環(huán)梯度馴化，具體設(shè)置參數(shù)為：循環(huán)梯度馴化的乙醇馴化培養(yǎng)基中乙醇體積百分比濃度范圍為：最低濃度為1%-5%，最高濃度為10%-15%；循環(huán)梯度馴化的溫度范圍為：最低溫度為28-32?℃，最高溫度為40-45?℃；每個(gè)梯度采用乙醇體積百分比濃度的梯度增幅1%-3%及采用溫度梯度增幅0.5℃-3℃；循環(huán)馴化多次，最后得到耐高溫耐乙醇的生香酵母。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的馴化方法，其特征在于：步驟（1）具體為：將市售的生香酵母純化培養(yǎng)后在30℃下用麥芽汁培養(yǎng)基培養(yǎng)7天得發(fā)酵液，以國標(biāo)GB/T?10345-2007為標(biāo)準(zhǔn)，聞香并測(cè)定發(fā)酵液酒精度、總酯，達(dá)標(biāo)的酵母菌株即為生香優(yōu)良的酵母菌株。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的馴化方法，其特征在于：步驟（2）中凝膠球顆粒的具體制備方法為：采用1.0-3.0?g海藻酸鈉加入有50?mL蒸餾水的250?mL三角瓶中，加熱溶解后冷卻，取3-5?mL對(duì)數(shù)期生香酵母菌液加入三角瓶中混合均勻，混合液通過注射器注入1-3%重量百分比濃度的氯化鈣水溶液中，制備成凝膠球顆粒。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的馴化方法，其特征在于：所述凝膠球顆粒的直徑為2-3mm。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的馴化方法，其特征在于：步驟（3）中循環(huán)梯度馴化的乙醇馴化培養(yǎng)基中乙醇體積百分比濃度范圍為：最低濃度為1%-3%，最高濃度為10%-12%；循環(huán)梯度馴化的溫度范圍為：最低溫度為28-30℃，最高溫度為40-42℃。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的馴化方法，其特征在于：循環(huán)梯度馴化的乙醇馴化培養(yǎng)基中乙醇體積百分比濃度梯度具體為：2%、4%、6%、8%、10%、12%，循環(huán)梯度馴化的溫度梯度具體為：30℃、32℃、34℃、36℃、38℃、40℃、42℃。

7.根據(jù)權(quán)利要求1或5或6所述的馴化方法，其特征在于：步驟（3）中循環(huán)馴化次數(shù)為2-5次。

8.根據(jù)權(quán)利要求1或5或6所述的馴化方法，其特征在于：步驟（3）中每個(gè)梯度的馴化時(shí)間為24-72小時(shí)。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的馴化方法，其特征在于：每個(gè)梯度的馴化時(shí)間為40-48小時(shí)。

10.根據(jù)權(quán)利要求1或2或5或6所述的馴化方法，其特征在于：乙醇馴化培養(yǎng)基由乙醇與YPD液體培養(yǎng)基混合組成。