[發(fā)明專利]一種基于納米金和氧化石墨烯的雙信號(hào)放大ELISA檢測(cè)方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310003676.1
• 申請(qǐng)日: 2013-01-05
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103913573A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-07-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 錢小紅;張養(yǎng)軍;林虹君
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N33/543
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;任鳳華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種納米金和氧化石墨烯的新用途，特別涉及一種納米金和氧化石墨烯在放大ELISA檢測(cè)信號(hào)中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定（Enzyme-Linked?Immunosorbent?Assay，ELISA）是各生物、化學(xué)實(shí)驗(yàn)室以及臨床檢測(cè)中常用的分析檢測(cè)方法。ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí)，受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開(kāi)。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過(guò)反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。但是昂貴的抗體價(jià)格和非足夠低的檢測(cè)限已不能滿足當(dāng)前實(shí)際應(yīng)用的要求。

目前，納米材料在各領(lǐng)域的應(yīng)用較為廣泛，尤其是納米金的應(yīng)用多年來(lái)一直得到大家的認(rèn)可。納米金即指金的微小顆粒，其直徑在1～100nm，具有高電子密度、介電特性和催化作用，能與多種生物大分子結(jié)合，且不影響其生物活性。

氧化石墨烯是近幾年才被大家關(guān)注的，在材料學(xué)領(lǐng)域得到了越來(lái)越廣泛的應(yīng)用，但是其在生命科學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用還鮮有報(bào)道。

目前尚未有將納米金和氧化石墨烯同時(shí)用于ELISA檢測(cè)中的相關(guān)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種納米金和氧化石墨烯的新用途。

本發(fā)明所提供的納米金和氧化石墨烯的新用途，具體為納米金和氧化石墨烯在放大ELISA檢測(cè)信號(hào)中的應(yīng)用。所述ELISA檢測(cè)信號(hào)的放大可理解為在相同的檢測(cè)條件下，反應(yīng)結(jié)束后反應(yīng)液顏色更深，或OD值更大，可進(jìn)一步理解為檢測(cè)靈敏度的提高。

在所述應(yīng)用中，所述納米金的顆粒直徑可為10－100nm，如10-20nm。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所述納米金的顆粒直徑具體為16nm。所述氧化石墨烯為單原子層結(jié)構(gòu)。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種ELISA檢測(cè)方法。

本發(fā)明所提供的ELISA檢測(cè)方法，依次包括如下步驟：

（1）向載有包被原的酶標(biāo)板中加入能與所述包被原特異結(jié)合的待測(cè)物質(zhì)；

（2）向所述酶標(biāo)板中加入納米金標(biāo)記物；所述納米金標(biāo)記物為將納米金與蛋白甲和蛋白乙結(jié)合所得的物質(zhì)；所述蛋白甲是與所述待測(cè)物質(zhì)特異結(jié)合的蛋白，所述蛋白乙是與所述待測(cè)物質(zhì)不結(jié)合的蛋白；

（3）向所述酶標(biāo)板中加入氧化石墨烯標(biāo)記物；所述氧化石墨烯標(biāo)記物為將氧化石墨烯與蛋白丙結(jié)合所得的物質(zhì)；所述蛋白丙為與所述蛋白甲和所述蛋白乙結(jié)合的另一種蛋白。

所述方法中，在步驟（1）、（2）和（3）之后均包括用洗滌液進(jìn)行洗滌的步驟；所述洗滌液為ELISA檢測(cè)常用洗滌液。在步驟（3）后還包括加入顯色液進(jìn)行顯色反應(yīng)，以及加入終止液進(jìn)行終止反應(yīng)的步驟。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所述顯色液具體為TMB，所述終止液為2M硫酸。

所述方法中，所述納米金的顆粒直徑可為10－100nm。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所述納米金的顆粒直徑具體為16nm。所述氧化石墨烯為單原子層結(jié)構(gòu)。

所述方法中，各蛋白均為ELISA檢測(cè)中所涉及的抗原或抗體，當(dāng)然所述抗原也包括半抗原與載體蛋白的偶聯(lián)物。

在本發(fā)明中，所述ELISA檢測(cè)方法具體為改良的雙抗夾心法，相應(yīng)的，所述包被原為抗體；所述待測(cè)物質(zhì)為與所述包被原特異結(jié)合的抗原；所述蛋白甲為與所述待測(cè)物質(zhì)特異結(jié)合的一抗，所述蛋白乙為與所述待測(cè)物質(zhì)不結(jié)合的一抗；所述蛋白丙為抗所述蛋白甲和所述蛋白乙的酶標(biāo)二抗。