[發(fā)明專利]一種利用兩親性殼聚糖微球載體制備固定化脂肪酶的方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201310001606.2 | 申請日： | 2013-01-04 |
| 公開（公告）號： | CN103074322A | 公開（公告）日： | 2013-05-01 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 朱建星;王紅艷 | 申請（專利權(quán)）人： | 沈陽化工大學(xué) |
| 主分類號： | C12N11/10 | 分類號： | C12N11/10 |
| 代理公司： | 沈陽技聯(lián)專利代理有限公司 21205 | 代理人： | 張志剛 |
| 地址： | 110142 遼*** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 利用 兩親性殼 聚糖 載體 制備 固定 脂肪酶 方法 | ||
1.一種利用兩親性殼聚糖微球載體制備固定化脂肪酶的方法，其特征在于，所述方法包括：
a.制備兩親性殼聚糖微球載體：該載體基質(zhì)為微米級殼聚糖微球，將殼聚糖微球基質(zhì)C2位苯甲醛化，引入疏水相互作用基團，再用環(huán)氧氯丙烷活化C6位羥基，偶聯(lián)四乙烯五胺，制備兼具疏水作用苯基和親水性多胺手臂分子的殼聚糖微球，具體制備過程如下：
⑴殼聚糖微球基質(zhì)的制備：將質(zhì)量分數(shù)為5%的殼聚糖溶液與PEG2000充分混合，PEG2000在溶液中的質(zhì)量百分含量分別為3%，再加入與殼聚糖溶液等體積的液體石蠟及乳化劑span-80，高速攪拌30min使體系成乳液狀，然后加入0.12倍殼聚糖溶液體積的甲醛，攪拌1h后將乳液倒入10﹪NaOH/無水乙醇(V(NaOH):V(無水乙醇)=1:1)的混合液中靜置1h，用二甲苯、乙醇、去離子水充分洗滌，得到粒徑100~300μm的殼聚糖微球作為基質(zhì)；
⑵基質(zhì)微球的基團修飾：稱取殼聚糖微球于甲醇中，滴加苯甲醛，苯甲醛與微球質(zhì)量比3~6，60℃恒溫振蕩反應(yīng)10~16h，再加入硼氰化鈉室溫反應(yīng)12h，抽濾洗滌后將微球浸泡在氫氧化鈉水溶液中、緩慢加入環(huán)氧氯丙烷，環(huán)氧氯丙烷與微球質(zhì)量比6~12，50℃振蕩反應(yīng)5h，抽濾洗滌后將環(huán)氧化微球置于乙醇中，加入氫氧化鈉水溶液和四乙烯五胺，四乙烯五胺與微球質(zhì)量比10~15，55℃反應(yīng)6h，抽濾，用蒸餾水充分洗滌，干燥，得兩親性殼聚糖微球載體；
⑶戊二醛活化：取兩親性殼聚糖微球置于燒瓶中，按5倍氨基摩爾數(shù)的量加入戊二醛溶液，以乙醇作為反應(yīng)介質(zhì)60℃反應(yīng)1.5h，抽濾，然后用蒸餾水、pH7.5的磷酸緩沖液洗滌，真空干燥，得戊二醛活化載體；
b.?制備固定化脂肪酶:?將戊二醛活化載體分散于磷酸緩沖液中,?室溫下，加入脂肪酶，脂肪酶與載體的質(zhì)量比為0.02~0.15:1，固定化溫度為20~40℃，固定化時間為2~6h，固定化pH7.5~8.0,在搖床中振蕩2~6h，吸去酶液，用磷酸緩沖液清洗固定化酶至洗液中不含蛋白，所得固定化酶放于4℃冰箱中保存即可。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用兩親性殼聚糖微球載體制備固定化脂肪酶的方法，其特征在于，所述的疏水作用基團為苯基，親水性手臂分子為多胺。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用兩親性殼聚糖微球載體制備固定化脂肪酶的方法，其特征在于，所述兩親性殼聚糖微球載體的粒徑為100~300μm。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用兩親性殼聚糖微球載體制備固定化脂肪酶的方法，其特征在于，所述苯基密度為1.5-2.2mmol／g載體，氨基密度為2.8-3.6mmol／g載體。
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