[發(fā)明專利]纖維環(huán)與髓核一體化復(fù)合雙相支架及其構(gòu)建方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310000722.2
• 申請(qǐng)日: 2013-01-05
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103007351A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-04-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊強(qiáng);徐寶山;許海委;馬信龍;李秀蘭;夏群;張春秋
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津市天津醫(yī)院
• 主分類號(hào): A61L27/36
• 分類號(hào): A61L27/36;A61L27/22
• 代理公司: 天津市宗欣專利商標(biāo)代理有限公司 12103
• 代理人: 董光仁

1.一種纖維環(huán)與髓核一體化復(fù)合雙相支架，其特征在于：該雙相支架的外周是松質(zhì)骨制備的脫細(xì)胞脫鈣骨基質(zhì)明膠環(huán)，中央是髓核組織制備的脫細(xì)胞髓核基質(zhì)。

2.按照權(quán)利要求1所述纖維環(huán)與髓核一體化復(fù)合雙相支架，其特征在于：所述的松質(zhì)骨是豬股骨頭松質(zhì)骨。

3.按照權(quán)利要求1所述纖維環(huán)與髓核一體化復(fù)合雙相支架，其特征在于：所述的髓核組織是豬尾髓核。

4.如權(quán)利要求1所述一種纖維環(huán)與髓核一體化復(fù)合雙相支架的構(gòu)建方法，其是以下步驟構(gòu)建的：

a、制備脫細(xì)胞脫鈣骨基質(zhì)明膠環(huán)

取豬股骨頭的松質(zhì)骨，修整成纖維環(huán)形狀后，依次在室溫條件下進(jìn)行脫細(xì)胞脫鈣處理：

（1）、用體積比為1:1的氯仿甲醇混合液與松質(zhì)骨按1g/30ml的比例浸泡24h；???????

（2）、用0.6mol/L的HCl浸泡48h；

（3）、2?mmol/L?CaCl₂浸泡1h；

（4）、0.5?mmol/L?EDTA浸泡1h；

（5）、8?mmol/L的LiCl浸泡1h；

（6）、5%?Triton?X-100浸泡24h；

（7）、去離子水反復(fù)沖洗，即得；

b、制備脫細(xì)胞髓核基質(zhì)微絲懸液

（1）、將豬尾椎間盤髓核組織放入含0.6%TritonX-100和1.0%脫氧膽酸的Tris－HCL緩沖液中，超聲頻率42?kHz±6%，處理10分鐘，過(guò)濾去除骨屑雜質(zhì)；

（2）、放入含0.6%TritonX-100和1.0%脫氧膽酸的Tris－HCL緩沖液中，室溫持續(xù)震蕩72h，150r/min，每隔24h換液一次、超聲10分鐘，去離子水沖洗干凈；

（3）、將髓核組織用含720mU/mL?DNaseⅠ和720mU/mL?RNase?A的PBS消化液37℃消化48小時(shí)，去離子水沖洗干凈；

（4）、粉碎、梯度離心，取直徑為100nm～5μm左右的髓核基質(zhì)微絲，蒸餾水反復(fù)沖洗，與雙蒸水按重量百分比配成0.5％～5％的白色乳懸液；

c.支架構(gòu)建和交聯(lián)

將脫細(xì)胞髓核基質(zhì)微絲懸液注入到脫細(xì)胞脫鈣骨基質(zhì)明膠環(huán)中央，滲透深度0.5～2mm，-20℃～-80℃,1～48小時(shí)冷凍凍干后構(gòu)成脫細(xì)胞髓核基質(zhì),先行紫外線照射交聯(lián)，紫外線波長(zhǎng)258nm，距離光源5～10cm，交聯(lián)時(shí)間12～48h；然后化學(xué)試劑交聯(lián)，濃度為0.001～1M的碳化二亞胺與濃度為0.001～1M的N-羥基琥珀酰亞胺混合的水溶液中交聯(lián)1h～48h，再次凍干，消毒即得。

5.按照權(quán)利要求4所述纖維環(huán)與髓核一體化復(fù)合雙相支架的構(gòu)建方法，其特征在于：化學(xué)試劑交聯(lián)是由濃度為0.01～0.3M的碳化二亞胺與濃度為0.005～0.2M的N-羥基琥珀酰亞胺混合的水溶液。