[發(fā)明專利]調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)的組合物和方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201280071256.0
• 申請(qǐng)日: 2012-07-31
• 公開（公告）號(hào): CN104350070A
• 公開（公告）日: 2015-02-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 威爾弗雷德·杰弗里斯;根茨·芭莎;凱拉·奧米盧西克;阿納·查維斯·斯特恩布克
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 生物防護(hù)科技公司
• 主分類號(hào): C07K19/00
• 分類號(hào): C07K19/00;A61K38/01;A61K39/00;A61K39/385;A61P37/04;C07K14/705;C07K17/04;C12N5/07;C12N5/0784;C12Q1/00
• 代理公司: 北京律盟知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11287
• 代理人: 張世俊

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及免疫調(diào)節(jié)領(lǐng)域，具體地說，涉及調(diào)節(jié)MHC?I介導(dǎo)的免疫反應(yīng)的組合物和方法。

背景技術(shù)

在初次免疫反應(yīng)期間，樹突狀細(xì)胞為啟動(dòng)適應(yīng)性免疫反應(yīng)的主要抗原呈遞細(xì)胞(APC)。樹突狀細(xì)胞吸收含有抗原蛋白質(zhì)的死細(xì)胞和細(xì)胞殘?jiān)⒓庸み@些外源衍生的抗原以用于呈遞在MHC?I上。這一過程稱為MHC?I交叉呈遞。這一過程為對(duì)抗病毒、腫瘤、自抗原和同種異體移植物的CD8⁺T細(xì)胞介導(dǎo)的反應(yīng)所必需。

CD74是樹突狀細(xì)胞內(nèi)部工作的細(xì)胞機(jī)構(gòu)的重要部分用于調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物初次免疫反應(yīng)。樹突狀細(xì)胞具有能夠使其感應(yīng)并接著響應(yīng)外來威脅的專用途徑。到目前為止，尚無人能夠拼湊出使主要組織相容性I類(MHC?I)能夠發(fā)現(xiàn)并‘碰撞’外來侵入物引起免疫系統(tǒng)對(duì)病原體的必要呈遞和識(shí)別的線路。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個(gè)目標(biāo)是提供調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)的組合物和方法。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了一種刺激MHC?I介導(dǎo)的免疫反應(yīng)的方法，其包含在樹突狀細(xì)胞中刺激MHC?I內(nèi)溶酶體交叉呈遞。刺激MHC?I內(nèi)溶酶體交叉呈遞可包含在樹突狀細(xì)胞中過度表達(dá)CD74和/或?qū)⒖乖邢騇HC?I內(nèi)溶酶體交叉呈遞路徑。

根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了一種融合蛋白質(zhì)，其包含抗原或其片段和CD74內(nèi)溶酶體靶向序列。還提供了表達(dá)所述融合蛋白質(zhì)的核酸分子、載體和細(xì)胞。

根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了一種隔室，其用于CD74依賴性MHC?I交叉呈遞路徑。這種隔室可能是內(nèi)溶酶體。

根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了一種組織蛋白酶裂解肽和所述肽的多聯(lián)體，其用于刺激初次免疫反應(yīng)。

附圖說明

圖1.Cd74^-/-小鼠產(chǎn)生較弱的抗病毒初次免疫反應(yīng)。(a)在經(jīng)低效價(jià)VSV(感染50％組織培養(yǎng)細(xì)胞單層或小鼠的2×10⁵劑量)感染后6天分離的Cd74^+/+、Cd74^-/-和Tap1^-/-小鼠的脾臟中產(chǎn)生VSVNP(52-59)特異性(H-2K^b-VSVNP)CD8⁺T細(xì)胞，接著用VSVNP(52-59)刺激5天。象限中的數(shù)字指示每次通過的細(xì)胞百分比。(b)在如a中獲得的細(xì)胞中H-2K^b-VSVNP(52-59)特異性CD8⁺T細(xì)胞頻率(n＝3種小鼠/基因型)。(c)在如a中VSV感染和體外加強(qiáng)之后產(chǎn)生的CTL的標(biāo)準(zhǔn)⁵¹Cr釋放分析。*P<0.05(史都登氏t檢驗(yàn))。數(shù)據(jù)代表至少3次單獨(dú)實(shí)驗(yàn)(平均值±s.d.)。

圖2.Cd74^-/-小鼠在誘發(fā)初次免疫反應(yīng)方面的缺陷在于其抗原呈遞細(xì)胞且與CD4⁺T細(xì)胞無關(guān)。(a)從用VSV(感染50％組織培養(yǎng)細(xì)胞單層或小鼠的1×10⁵劑量)注射且在體外用VSVNP(52-59)加強(qiáng)的嵌合體(n＝3)獲得的脾臟中產(chǎn)生VSVNP(52-59)特異性CD8⁺細(xì)胞。(b)在如a中體外加強(qiáng)之后產(chǎn)生的CTL的細(xì)胞毒性分析。目標(biāo)細(xì)胞在指示時(shí)經(jīng)VSVNP(52-59)脈沖處理或保持未標(biāo)記作為非特異性殺傷的對(duì)照。(c)在如a中VSV感染和體外加強(qiáng)之后通過靜脈內(nèi)注射抗CD4(+Ab)耗盡CD4⁺細(xì)胞的Cd74^+/+→Cd74^-/-和Cd74^-/-→Cd74^+/+嵌合體(n＝3)的脾臟中產(chǎn)生對(duì)H-2K^b-VSVNP(52-59)具有特異性的CD8⁺T細(xì)胞。(d)在如c中體外加強(qiáng)之后產(chǎn)生的CTL的如b中的細(xì)胞毒性分析。*P<0.05(史都登氏t檢驗(yàn))。數(shù)據(jù)代表3次實(shí)驗(yàn)(a)、至少3次實(shí)驗(yàn)(b)、2次實(shí)驗(yàn)(c)或3次實(shí)驗(yàn)(d；平均值和s.d.)。