[發明專利]N-羥基琥珀酰亞胺用于改善綴合物的穩定性的用途

在審

• 申請號: 201280068773.2
• 申請日: 2012-12-13
• 公開（公告）號: CN104093425A
• 公開（公告）日: 2014-10-08
• 發明（設計）人: 劉芳;G·W·安普萊特;D·H·梅舒拉姆
• 申請（專利權）人: 伊繆諾金公司
• 主分類號: A61K39/395
• 分類號: A61K39/395
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 袁志明

交叉參考相關申請

本專利申請要求2011年12月13提交的美國臨時專利申請No.61/570,139的利益，將所述美國臨時專利申請通過引用并入本文。

發明背景

對癌癥和其它疾病的治療是有用的抗體-藥物綴合物通常由三個不同的元件組成：細胞結合劑、接頭和細胞毒素劑。常用制劑方法之一包括修飾步驟，其中將細胞結合劑與雙官能接頭反應以形成共價地連接于具有反應性基團的接頭的細胞結合劑；純化步驟，其中將修飾抗體從修飾反應的組分純化出來；綴合步驟，其中將修飾細胞結合劑與細胞毒素劑反應以從接頭(使用反應性基團)至細胞毒素劑形成共價化學價；和第二純化步驟，其中將綴合物從綴合反應的其它組分純化出來。

盡管在制備抗體-藥物綴合物上取得了進展，但目前的方法受到幾個因素限制。例如，雙官能交聯劑對抗體的結合在本領域中目前使用的條件下是異質的，這導致包含穩定的酰胺鍵和不穩定的酯鍵的綴合物。據認為綴合物中不穩定酯鍵的存在導致藥物從綴合物釋放和綴合物的不穩定性。

最近的臨床試驗已顯示抗體-藥物綴合物在治療許多不同類型的癌癥中的有前景的作用。因此，存在對改進的制備更穩定的并且比由目前的方法產生的抗體-藥物綴合物更純的抗體-藥物綴合物的方法的需要。本發明提供了這樣的方法。本發明的這些和其它有利方面以及另外的發明特征根據本文中提供的本發明的描述將變得顯然。

發明概述

本發明提供了用于在外源N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)存在的情況下制造具有改善的穩定性的細胞結合劑-細胞毒素劑綴合物的方法。

發明詳述

本領域技術人員將理解，包含化學地偶聯于細胞毒素劑的抗體的綴合物(“抗體-細胞毒素劑綴合物”)通常如下進行制備：利用雙官能交聯試劑(通常利用交聯試劑上的N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)反應基團)修飾抗體，純化具有連接于其的接頭的抗體，將細胞毒素劑綴合于具有連接于其的接頭的抗體，和純化抗體-細胞毒素劑綴合物。本發明通過使穩定地鍵合于細胞結合劑的接頭的量減少至最少和使導致綴合物不穩定性的不期望的副反應降至最低來改進這樣的方法。

作為雙官能接頭(例如，SPP、SPDB、SMCC)的水解/氨解的結果，在修飾反應過程中產生少量NHS。NHS目前被本領域技術人員當作修飾反應的不期望的(或至少中性)副產物。因此，目前的方法通常包括在添加細胞毒素劑之前純化修飾抗體，這導致在綴合反應之前NHS的除去。

令人驚訝地發現，在外源NHS存在的情況下制備抗體-細胞毒素劑綴合物導致綴合物的穩定性的顯著增加，如通過游離類美登素的釋放測量的。因此，本發明提供了用于在外源NHS存在的情況下制造具有改善的穩定性的細胞結合劑-細胞毒素劑綴合物的方法。

本發明提供了用于制備細胞結合劑-細胞毒素劑綴合物的方法，所述方法包括添加外源NHS。如本文中所用，“外源NHS”是指在方法過程中從外部來源添加的NHS，并且不是指在修飾反應過程中作為雙官能接頭的水解/氨解的結果產生的NHS。