[發(fā)明專利]用于從脂肪組織分離非脂肪細(xì)胞的方法和裝置

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201280068472.X
• 申請日: 2012-12-06
• 公開（公告）號: CN104302760A
• 公開（公告）日: 2015-01-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: L·R·黃;施冰如;廖智菁
• 申請（專利權(quán)）人: 財團(tuán)法人工業(yè)技術(shù)研究院;妍芳生技開發(fā)股份有限公司
• 主分類號: C12N5/07
• 分類號: C12N5/07
• 代理公司: 永新專利商標(biāo)代理有限公司 72002
• 代理人: 過曉東

發(fā)明背景

生物學(xué)和醫(yī)學(xué)中的許多技術(shù)如細(xì)胞分離、流式細(xì)胞術(shù)、細(xì)胞測定以及細(xì)胞療法依賴于解離組織來分離個別細(xì)胞。處理組織樣品經(jīng)常涉及多種動作，如切碎、洗滌、酶消化、解離、孵育、混合、凝塊和碎片去除，以及濃縮。在研究實驗室中，這些動作經(jīng)常手動進(jìn)行，并將樣品在一個開放環(huán)境中從測試管至測試管進(jìn)行著轉(zhuǎn)移。所述手動過程需要訓(xùn)練有素的人員并且對生物樣品的操縱會造成潛在的污染和感染風(fēng)險。

最近，研究和醫(yī)學(xué)團(tuán)體一直關(guān)注于從脂肪組織分離細(xì)胞。已經(jīng)研發(fā)了數(shù)種技術(shù)來從患者或動物安全地去除脂肪組織部分。例如，腫脹吸脂和水射流吸脂技術(shù)已經(jīng)被廣泛用來從患者去除脂肪組織。脂肪組織含有儲存脂肪的脂肪細(xì)胞和維持組織的其它非脂肪細(xì)胞。脂肪組織的組成細(xì)胞、其作用以及其相互作用尚未被完全了解，并且是活躍的學(xué)術(shù)和臨床研究的主題。

為了研究脂肪組織，可能需要解離組織并且分離組成細(xì)胞。所述過程可能涉及釋放組成細(xì)胞、去除碎片和不想要的細(xì)胞、濃縮并富集相關(guān)細(xì)胞，以及洗滌細(xì)胞。所述過程可為費力的，并且可能要求訓(xùn)練有素的操作人員、昂貴的裝備設(shè)置以及具有適當(dāng)生物安全性措施的實驗室。所述多個操縱動作還會引起相關(guān)細(xì)胞的顯著損失，從而使得罕見且普遍性低的細(xì)胞的分離困難并且不可靠。此外，當(dāng)使用人樣品時，交叉污染和感染的風(fēng)險可能是顯著的。

因此需要具有用于從脂肪組織有效分離相關(guān)細(xì)胞、尤其是除脂肪細(xì)胞以外的細(xì)胞的方法，并且具有使從脂肪組織分離非脂肪細(xì)胞變得容易且安全的裝置。

包含柔性塑料片的袋被廣泛用于收集、處理和儲存生物組織樣品，如外周血、臍帶血、血液組分、血漿、骨髓、脂肪抽吸物等。袋具有柔性且可膨脹優(yōu)勢，并且能夠改變其內(nèi)部體積來適應(yīng)不同體積的樣品。為了有利于樣品處理，經(jīng)常使用外部管線將許多個別袋流體連接，以形成一個系統(tǒng)。所述袋和管線系統(tǒng)已經(jīng)被廣泛用于樣品處理，例如血液份化、細(xì)胞分離等。然而，由于集成了較多的處理動作，因此袋和管線系統(tǒng)迅速變得笨重，難以使用并且很難制造。系統(tǒng)變成絕緣套管狀，且變得容易纏繞，并且許多部件彼此懸擺。為了使用所述裝置，操作人員需要高水平的訓(xùn)練和長期的經(jīng)驗來設(shè)置這種復(fù)雜的裝置。操作人員還需要另外注意按正確的順序?qū)⒏鞣N部分安裝在正確的位置。此外，這些裝置和系統(tǒng)的制造可為困難且昂貴的，因為多個袋、部件以及管線伸展段經(jīng)常必須個別地制造并且然后進(jìn)行組裝。所述裝置的組裝可能為勞動密集型的，并且會呈現(xiàn)泄露和污染、即系統(tǒng)故障的風(fēng)險。對于臨床應(yīng)用來說，裝置經(jīng)常是單次使用的，并且其可靠性是重要的。密集的勞力和裝置故障風(fēng)險是這些常規(guī)絕緣套管狀系統(tǒng)的主要障礙。

發(fā)明概述

根據(jù)本公開的一方面，提供一種用于從脂肪組織樣品分離非脂肪細(xì)胞的設(shè)備。所述設(shè)備包括第一材料片、粘結(jié)至第一材料片的第二材料片以及界定在第一材料片與第二材料片之間的多個室，所述多個室包括：樣品解離室，其包括入口和出口；廢物收集室，其包括與樣品解離室的出口流體連通的入口；以及細(xì)胞精制室，其包括與樣品解離室流體連通的入口，以及出口。

根據(jù)一些實施方案，樣品解離室進(jìn)一步包括網(wǎng)式過濾器，所述網(wǎng)式過濾器包括孔徑在70μm與300μm之間的孔。

根據(jù)一些實施方案，所述設(shè)備進(jìn)一步包括網(wǎng)式過濾器，所述網(wǎng)式過濾器包括在細(xì)胞精制室中、包括孔徑在20μm與50μm之間的孔。

根據(jù)一些實施方案，樣品解離室進(jìn)一步包括第一網(wǎng)式過濾器，所述第一網(wǎng)式過濾器包括具有第一孔徑的孔，并且其中細(xì)胞精制室進(jìn)一步包括第二網(wǎng)式過濾器，所述第二網(wǎng)式過濾器包括具有第二孔徑的孔，其中第二孔徑小于第一孔徑。

根據(jù)一些實施方案，所述設(shè)備進(jìn)一步包括控制樣品解離室、廢物收集室以及細(xì)胞精制室之間的流體連接的構(gòu)件。

根據(jù)一些實施方案，控制流體連接的構(gòu)件包括旋塞閥。

根據(jù)一些實施方案，所述設(shè)備進(jìn)一步包括流量控制裝置，所述流量控制裝置被構(gòu)造來將清洗溶液和解離溶液中的至少一種引入到樣品解離室中，并且具有與樣品解離室流體連通的出口。

根據(jù)一些實施方案，所述設(shè)備進(jìn)一步包括用于對樣品解離室和細(xì)胞精制室中的一個施加壓力的構(gòu)件。

根據(jù)一些實施方案，所述設(shè)備進(jìn)一步包括下游處理設(shè)備，所述下游處理設(shè)備與細(xì)胞精制室的出口流體連通并且包括至少一個微流體裝置，所述微流體裝置被構(gòu)造來將從細(xì)胞精制室輸出的流體分離成第一溶液和第二溶液，所述第一溶液具有第一濃度的一種或多種相關(guān)細(xì)胞，所述第二溶液具有小于第一溶液的濃度的所述一種或多種相關(guān)細(xì)胞，其中相關(guān)細(xì)胞包括從脂肪組織樣品分離的非脂肪細(xì)胞。