[發明專利]細胞培養基和方法

有效

• 申請號: 201280068225.X
• 申請日: 2012-12-21
• 公開（公告）號: CN104080905B
• 公開（公告）日: 2016-11-16
• 發明（設計）人: R·菲克;S·巴雷特;江舟;D·賈德
• 申請（專利權）人: 生命技術公司
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 林遠成

技術領域

本文提供了與新類型的細胞培養基、進料和補充物有關的組合物、方法和用途。所述培養基、進料和補充物具有幾種期望的性能，所述性能包括、但不限于：具有超過它們的正常溶解度限度的某些組分、增加的輻射耐受性、延長的釋放性能、高溶解度、增加的貯存期限和熱穩定性。在某些實施方案中，這樣的特征將改善用戶工作流和生物反應器生產力。

附圖說明

下文描述的且并入本說明書中和構成本說明書的一部分的以下附圖解釋了示例性實施方案，它們不應當視為限制本公開內容的范圍。

圖1顯示了為制備細胞培養基、進料和/或補充物組分的微米/納米混懸液而開發的新方法。

圖2顯示了微米混懸液和液體進料的細胞生長、蛋白生產和遞送的性能對比。微米混懸液在試驗的條件下的性能與液體進料相當，并表現出比液體進料更高的遞送效力。

圖3是包囊的微米混懸液珠子的示意圖，所述珠子被另外包被以延長釋放。

圖4顯示了PLGA包衣對延遲組分從微囊化的微米混懸液制品內的釋放的影響。a)上圖：無包衣；b)下圖：使用PLGA?A和PLGA?B的包衣的對比。A和B具有不同的丙交酯:乙交酯比率。具有85:15比率的PLGA?B表現出良好的延長釋放性能，并維持它的形狀，具有在溶液中釋放組分>15天的能力。

圖5顯示了輻照對本公開內容的制品的影響。用以下物質培養的細胞中的蛋白生產效率的對比：i)輻照的微米混懸液；ii)干燥的、包囊的微米混懸液，其與iii)中的那些類似；iii)未輻照的對照液體進料，其通過過濾來滅菌。

圖6表明，當在輻照的試驗進料中培養細胞時，大約30kGy的輻照不會負面地影響(a)細胞生長(上圖)；或者，(b)蛋白生產(下圖)。還試驗了另外的補充物68和86，并且表現出類似的結果(數據未顯示)。

圖7表明，γ輻照對微米混懸液和對干燥的、包囊的微米混懸液存在可忽略的影響。該圖顯示了與未輻照的液體對照相比，在微膠囊(“珠子”)中或作為微米混懸液(MS)，30kGy的γ如何影響包囊的化合物(參見最右側)。NG＝沒有γ輻照,和G＝γ-輻照。

圖8顯示了包含不穩定組分的微囊化珠子的示意圖，所述不穩定組分被包埋和/或包裹在抗氧化劑中以通過減少在輻照過程中產生的氧化物質的影響來保護不穩定的分子。

圖9顯示了反應性物質的螯合作用以及痕量元素中的金屬離子與氨基酸的示例性配位絡合物的形成。

圖10顯示了制備微米混懸液和包囊的微米混懸液的方法的示意圖。

圖11顯示了輻照的、微囊化的珠子向生物反應器中的直接添加的2種選擇。左圖顯示了在可高壓滅菌的多孔金屬過濾器內添加的珠子；或者，右圖表明，可以將珠子直接加入培養物中。

圖12：在以下情況下，使用多孔金屬過濾器裝置引入培養物中的補充物的延長釋放的對比：(a)具有PLGA包衣的微米混懸液珠子：上圖，和(b)沒有珠子，僅AGT進料。

發明概述

在本公開內容中描述的培養基、進料和補充物組合物具有幾種期望的性能，所述性能包括、但不限于：(i)以“超濃縮”水平遞送某些組分的能力，所述“超濃縮”水平遠遠超過它們在培養系統中的正常溶解度限度，(ii)即使在輻射滅菌以后，增加的維持培養基/進料功能性的能力，(iii)增加的延長釋放內部組分的能力，(iv)高溶解度且快速的溶解，(v)干燥形式下的較長的貯存期限，(vi)增加的熱穩定性，(vii)多達8個log的減小的病毒污染風險，(viii)與其它滅菌技術(諸如UV、過濾和/或HTST巴氏消毒)相組合的能力，(ix)應用于多種培養基形式(諸如AGT、DPM、APM)以及具有較高濃度的不穩定組分的制劑的能力，(x)應用于多種產品類型(諸如培養基、進料、補充物、功能性添加劑等)的能力。由于這些特征，所述組合物可以直接加入生物反應器中或加入已經在進行中的培養物中，并由此可以改善用戶工作流和生物反應器生產力。

因此，在本公開內容中描述的組合物、方法和用途部分地涉及包含微米混懸液的細胞培養基、濃縮進料、功能性添加劑、補充物；還可以涉及包含一種或多種包囊的微米和/或納米混懸液的新細胞培養基、進料和/或補充物組合物；還可以涉及使用輻射將以上組合物滅菌，使得所述培養基/進料的功能性即使在暴露于輻射以后也得到維持。本公開內容也提供了制備這樣的培養基的方法，包括此類培養基的特征及其用途。貫穿本公開內容，有時可能僅提及細胞培養基，但是它在適用的情況下也包括進料和/或補充物。