[發明專利]體液的細胞分析

在審

• 申請號: 201280064502.X
• 申請日: 2012-12-19
• 公開（公告）號: CN104024437A
• 公開（公告）日: 2014-09-03
• 發明（設計）人: 吳炯;艾米麗·H.·林;楊金平
• 申請（專利權）人: 雅培制藥有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N33/48;C12M3/00;G01N1/10
• 代理公司: 北京弘權知識產權代理事務所(普通合伙) 11363
• 代理人: 榮文英;郭放

相關申請的交叉引用

本申請要求2011年12月27日提交的美國臨時專利申請序號61/580,623的優先權權益；所述美國臨時專利申請的整個公開內容以引用的方式整體并入本文。

背景技術

各種方法用于細胞分析，包括經由光或熒光顯微術的目測和/或自動檢驗。通常實施這些類型的細胞檢查和分析以便獲得關于樣品中的細胞譜系、成熟階段和細胞計數的信息。

流式細胞術是在非均質樣品中的不同細胞類型之間進行識別和區分的方法。在流式細胞儀中，細胞一次一個或幾乎一次一個穿過感測區域，其中每個細胞被能量源照射。典型地，單一波長光源(例如，激光器等)用作能量源并且各種傳感器中的一個或多個基于細胞與施加能量的相互作用來記錄數據。流式細胞術普遍地用于血液學并且已經尤其成功地診斷血液癌癥。除了流式細胞術以外，其它分析方法用于血液學中并且表征細胞群體。

血液樣品傾向于具有高濃度的細胞。不論通過流式細胞術或其它技術，具有顯著較低濃度細胞的樣品的分析較困難并且因此不太常見。另外，被設計成測量全血樣品的傳統血液學分析器傾向于具有對于低端細胞濃度的有限檢測靈敏度。在一些情況下，樣品的手動檢查是細胞分析的唯一可用方法。在醫學、微生物學和其它領域需要分析具有低細胞計數的樣品的改進方法。

發明內容

在一方面，本公開提供分析含有細胞的體液的方法，所述方法包括：用熒光染料將體液染色，其中熒光染料滲透細胞膜并且結合至核酸以在細胞內形成染料復合物；用來自能量源的能量照射染色體液；并且測量染色體液中的由染料復合物發出的熒光信號。

在一些這類方面，體液包含少于約20個細胞/微升。

在一些這類方面，體液包含超過約20個細胞/微升。

在一些這類方面，核酸選自DNA和RNA。

在一些這類方面，能量源提供具有可見光譜中的波長的單色光，并且其中單色光的波長和熒光信號的波長是不同的。

在一些這類方面，與染料復合物相比，未結合熒光染料在用來自能量源的能量照射時發出較少熒光。

在一些這類方面，在未結合至核酸時，未結合熒光染料在用來自能量源的能量照射時不發熒光，以使得沒有染料復合物的細胞不發出熒光信號。

在一些這類方面，所述方法包括基于存在或不存在熒光染料來區分具有細胞核的細胞與沒有細胞核的細胞。

在一些這類方面，測量涉及點計(enumerating，計算、計數)和區分RBC和WBC。

在一些這類方面，所述方法在測量之前不涉及使RBC溶解(lysing)。

在一些這類方面，體液包含完整WBC和RBC。

在一些這類方面，測量使用自動血液分析器、流式細胞儀或體液樣品的其它診斷分析器來執行。

在一些這類方面，測量包括使體液流經血細胞計數器中的流槽(flow?cell，流動室)。

在一些這類方面，熒光染料提供在進一步包括水的組合物中。

在另一方面，本公開提供分析流體的方法，其中所述流體含有少于約40個細胞/微升，所述方法包括：使流體與熒光染料接觸，其中熒光染料滲透細胞膜并且結合至核酸以在細胞內形成染料復合物；用來自能量源的能量照射流體；并且測量流體中的由染料復合物發出的熒光信號。

在一些這類方面，所述流體含有少于約20個細胞/微升。

在一些這類方面，所述流體含有小于約5個細胞/微升。

在一些這類方面，所述流體是體液。

在一些這類方面，所述流體是生物流體。

在另一方面，本公開提供區分細胞的方法，所述方法包括：使細胞與包含熒光染料的溶液接觸，其中熒光染料是水溶性的，能夠滲透細胞膜，并且能夠結合至核酸；用來自激發光源的激發光照射細胞；并且測量來自細胞的光發射，并且基于測量來區分含有核酸的細胞與沒有核酸的細胞。

在另一方面，本公開提供分析體液的組合物，所述組合物包括水和熒光染料，其中熒光染料是水溶性的，能夠滲透細胞膜，并且能夠結合至核酸。

在另一方面，本公開提供血液學系統，其包括：用于保持將要分析的樣品的樣品保持器；用于將至少一部分將要分析的樣品與染色組合物混合的混合容器；用于存儲染色組合物的存儲容器，其中染色組合物包含能夠滲透細胞膜并且結合至核酸的染料，并且其中染料在結合至核酸時發熒光；流槽；用于將電磁能施加至流槽的至少一個能量源；用于檢測來源于流槽內的熒光的一個或多個檢測器；和用于檢測散射的可見光的一個或多個可見光檢測器。