[發明專利]用于從蛋白質溶液中除去病毒的方法

有效

• 申請號: 201280061308.6
• 申請日: 2012-12-19
• 公開（公告）號: CN104023752B
• 公開（公告）日: 2017-09-08
• 發明（設計）人: P·約翰森;C·J·克普卡
• 申請（專利權）人: 諾維信公司
• 主分類號: A61L2/00
• 分類號: A61L2/00;C07K1/30
• 代理公司: 北京尚誠知識產權代理有限公司11322
• 代理人: 顧小曼

發明領域

本發明涉及一種用于純化蛋白質的方法。

發明背景

分離自動物來源的蛋白質當例如在食品或藥物產品中使用這些蛋白質時易于被不需要的病毒顆粒和/或病毒DNA污染。已知用于純化此類蛋白質還將降低病毒顆粒和/或病毒DNA的水平的方法，例如層析、過濾、離心、提取或沉淀。然而，在一些情況下，純化一種感興趣的蛋白質是困難的、耗時的和/或昂貴的。所以，本發明的一個目的是提供一種用于從感興趣的蛋白質中除去任何受污染的病毒顆粒和/或病毒DNA的方法。此類方法在工業規模中應該是快速的、有用的、廉價且有效的。

胰蛋白酶(EC3.4.21.4)是一種發現于許多脊椎動物的消化系統內并在其中水解蛋白質的絲氨酸蛋白酶。胰蛋白酶在哺乳動物的胰臟中以高數量可獲得，并且例如豬胰蛋白酶和牛胰蛋白酶可以相當容易地純化。因此，胰蛋白酶已經被廣泛地應用于各種生物技術工藝中。另外，將胰蛋白酶用于嬰兒食品中以預消化蛋白質。

2型豬環狀病毒(PCV2)是一種在真核細胞中自主復制的小的無包膜病毒。它是斷奶仔豬多系統衰竭綜合征(PMWS)的病原，該綜合征是一種在豬中新出現的且多因素的疾病。

本發明的一個目的是提供一種用于從提取自豬胰腺的胰蛋白酶中除去PCV2病毒顆粒和/或病毒DNA的方法。

發明概述

本發明提供了一種用于從包括靶蛋白的水溶液中選擇性地除去病毒和/或病毒DNA的方法，所述方法包括：

a)將丙酮以選擇性地沉淀該病毒和/或病毒DNA的濃度添加至該溶液中，

b)進行一個分離步驟，以將沉淀的材料與包括該靶蛋白的溶液分開，

c)向該溶液中添加另外量的丙酮，以達到沉淀該靶蛋白的終濃度，并且

d)從該溶液中收集沉淀的靶蛋白。

發明詳細說明

本發明提供了一種用于從包括靶蛋白的水溶液中選擇性地除去病毒和/或病毒DNA的方法，所述方法包括：

a)將丙酮以選擇性地沉淀該病毒和/或病毒DNA的濃度添加至該溶液中，

b)進行一個分離步驟，以將沉淀的材料與包括該靶蛋白的溶液分開，

c)向該溶液中添加另外量的丙酮，以達到沉淀該靶蛋白的終濃度，并且

d)從該溶液中收集沉淀的靶蛋白。

為避免任何可能的疑問：以書面順序進行這些步驟。即，在步驟b)中進行分離，以將步驟a)的沉淀材料與包括該靶蛋白的溶液分開。在步驟c)中，向在步驟b)中獲得的溶液中添加另外量的丙酮。并且在步驟d)中，從該溶液中收集步驟c)的沉淀的靶蛋白。

該靶蛋白可以是任何蛋白質。它可以是一種分離自微生物，例如分離自細菌細胞或真菌細胞的蛋白質。它可以是一種分離自植物的蛋白質。優選地，它是一種分離自動物來源的蛋白質。此類蛋白質可能易于被例如源自表達了該蛋白質的來源生物的病毒顆粒和/或病毒DNA污染。

可以從一種哺乳動物來源獲得該靶蛋白。它可以獲得自哺乳動物組織，例如獲得自哺乳動物腺體。在一個優選實施例中，該靶蛋白獲得自牛或豬胰臟。在一個更優選實施例中，該靶蛋白獲得自豬胰臟。

該靶蛋白可以是一種酶，優選是一種活性酶或可以被再活化的酶。

可以獲得自哺乳動物胰臟(例如獲得自豬胰臟)的酶類包括但不限于：蛋白酶，包括但不限于胰蛋白酶、糜蛋白酶、糜蛋白酶B、胰肽酶E、羧肽酶A以及羧肽酶B；脂肪酶，包括但不限于甘油酯水解酶(脂肪酶)、磷脂酶A1、磷脂酶A2以及甾醇酯水解酶；核酸酶，包括但不限于核糖核酸酶以及脫氧核糖核酸酶；淀粉酶，包括但不限于α-淀粉酶。

在一個優選實施例中，該靶蛋白是一種蛋白酶，優選是一種獲得自哺乳動物來源的蛋白酶，例如獲得自胰臟，優選獲得自牛或豬胰臟，更優選獲得自豬胰臟。

在一個更優選實施例中，該靶蛋白是胰蛋白酶，優選獲得自胰臟的胰蛋白酶，更優選獲得自牛或豬胰臟的胰蛋白酶，甚至更優選獲得自豬胰臟的胰蛋白酶。

包括該靶蛋白的水溶液優選地具有一個低的導電性，例如低于3mS或低于1mS。這可以例如通過滲濾獲得，例如使用具有10,000Da的截留的膜。包括該靶蛋白的水溶液優選具有約2-5，例如約3-4，優選約3.1-3.9，如約3.5的pH。

該水溶液的干物質濃度可以是約8％-20％，例如約8％-15％，如約10％。