[發(fā)明專利]用于淺灰霉素和甲基淺灰霉素的生物合成的基因簇

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201280061301.4
• 申請日: 2012-10-11
• 公開（公告）號: CN104024272B
• 公開（公告）日: 2018-04-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: M.布洛恩斯特拉普;C.凱尼格;L.托蒂;J.溫克;W.勒希納;J.加森休伯;R.米勒;S.溫策爾;T.賓茲;C.沃爾茲
• 申請（專利權(quán)）人: 賽諾菲
• 主分類號: C07K14/36
• 分類號: C07K14/36;C12R1/465
• 代理公司: 北京坤瑞律師事務(wù)所11494
• 代理人: 史悅

1.核酸，其包含選自下述的至少一種核酸：

(a)核酸，其包含SEQ ID NO:1中所包含的、編碼SEQ ID No:2、9、16、17、19-22或27的蛋白質(zhì)的開放閱讀框(ORFs)1、8、15、16、18-21或26中的至少一個ORF，

(b)核酸，其編碼SEQ ID No:2、9、16、17、19-22或27的蛋白質(zhì)中的至少一種蛋白質(zhì)。

2.權(quán)利要求1的核酸，其中所述核酸包含至少2個ORF，所述ORF編碼SEQ ID No:2、9、16、17、19-22或27的任意蛋白質(zhì)，或如權(quán)利要求1的(b)項中所述的核酸。

3.權(quán)利要求1的核酸，其中所述核酸包含分別編碼SEQ ID NO:19、20、21和22的蛋白質(zhì)的ORF 18、19、20和21中的至少一個ORF，或如權(quán)利要求1的(b)項中所述的核酸。

4.權(quán)利要求1的核酸，其中所述核酸包含分別編碼SEQ ID NO:9、16和17的蛋白質(zhì)的ORF 8、15和16中的至少一個ORF，或如權(quán)利要求1的(b)項中所述的核酸。

5.權(quán)利要求1的核酸，其包含下述的淺灰霉素生物合成基因簇或由下述的淺灰霉素生物合成基因簇組成，所述淺灰霉素生物合成基因簇具有SEQ ID NO:1的序列。

6.表達載體，其包含權(quán)利要求1-5中任一項的核酸。

7.宿主細胞，其被權(quán)利要求6的表達載體轉(zhuǎn)化。

8.蛋白質(zhì)，其包含至少一個氨基酸序列，該氨基酸序列選自SEQ ID No:2、9、16、17、19-22或27。

9.抗體，其特異性地針對權(quán)利要求8中的至少一種蛋白質(zhì)。

10.權(quán)利要求1到5中任一項的核酸，權(quán)利要求6的表達載體，權(quán)利要求7的宿主細胞或權(quán)利要求8的蛋白質(zhì)，用于淺灰霉素和/或甲基淺灰霉素的產(chǎn)生的用途。

11.權(quán)利要求3的核酸，包含權(quán)利要求3的核酸的權(quán)利要求6的表達載體，由包含權(quán)利要求3的核酸的權(quán)利要求6的表達載體轉(zhuǎn)化的權(quán)利要求7的宿主細胞，或SEQ ID NOs:19、20、21和22中的至少一種蛋白質(zhì)，用于L-反式-4-甲基脯氨酸的產(chǎn)生的用途。

12.產(chǎn)生權(quán)利要求8中的至少一種蛋白質(zhì)的方法，所述方法包括：

a)表達權(quán)利要求1-5中任一項的核酸，和

b)任選地，分離所述蛋白質(zhì)。

13.產(chǎn)生淺灰霉素和/或甲基淺灰霉素的方法，所述方法包括：

a)提供權(quán)利要求8的至少一種蛋白質(zhì)，和

b)將a)的至少一種蛋白質(zhì)與L-N-甲基纈氨酸、L-亮氨酸、L-N-甲基蘇氨酸、L-脯氨酸、L-N-甲基亮氨酸和甘氨酸一起溫育，以產(chǎn)生淺灰霉素和/或甲基淺灰霉素。

14.產(chǎn)生L-反式-4-甲基脯氨酸的方法，所述方法包括：

a)提供權(quán)利要求8的至少一種蛋白質(zhì)，和

b)將a)的至少一種蛋白質(zhì)與L-亮氨酸、5-羥基亮氨酸、γ-甲基谷氨酸γ-半醛和/或3-甲基-Δ¹-吡咯啉-5-羧酸一起溫育，以產(chǎn)生L-反式-4-甲基脯氨酸。

15.鏈霉菌(Streptomyces)DSM 22643。

16.權(quán)利要求2的核酸，其中所述核酸包含編碼SEQ ID No:2、9、16、17、19-22或27的任何蛋白質(zhì)的至少三個ORF，或如權(quán)利要求1的(b)項中所述的核酸。

17.權(quán)利要求10的用途，其中所述蛋白質(zhì)是SEQ ID NOs:9、16和17中的至少一種蛋白質(zhì)。