[發明專利]生物液體中的稀有細胞的檢測、分離和分析

無效

• 申請號: 201280056066.1
• 申請日: 2012-11-13
• 公開（公告）號: CN104364389A
• 公開（公告）日: 2015-02-18
• 發明（設計）人: J·科霍斯羅維;L·H·凱爾納;H·班娜妮
• 申請（專利權）人: 科勒本斯公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N33/68
• 代理公司: 北京三友知識產權代理有限公司 11127
• 代理人: 龐東成;李棟修

技術領域

本發明涉及用于從生物液體中檢測、捕獲和分離稀有細胞以對其抗原性、表型和遺傳特性進行分析的免疫學方法和試劑盒。具體而言，本發明提供了用于對母體血液中的胎兒單核紅細胞(NRBC)進行檢測、捕獲、分離和分析的方法。?

背景技術

進行產前診斷以檢測胎兒的可能存在的染色體和基因異常使得父母和看護者能夠開始監控疾病或病癥的傾向早期治療。已經建立了產前診斷的實踐，以檢測胎兒可能存在的染色體和基因異常，因而使父母和照顧者能夠作出知情決定。在多種與生命相容的染色體異常中(非整倍體21、18、13、X、Y)(1)，由于存在全部或部分的21號染色體多余拷貝所導致的唐氏綜合癥(DS)，是最常見的引起智力遲緩的遺傳原因以及婦女尋求產前診斷的主要原因(1，2)。盡管通過對由絨毛膜絨毛取樣(3)、羊水穿刺(3，4)或臍帶取樣(5)獲得的胎兒組織進行核型分析從而確切檢測到染色體異常和單基因病是可能的，但是這些方法是高度侵入性的，需要有技術的專業人員，并且有高風險的流產(高至1％)和/或孕婦并發癥(3-5)的傾向。約1％的活胎出生、2％的35周歲以上孕婦以及約50％的自發性妊娠早期流產中會出現細胞基因紊亂(6)。在一百萬個活胎出生的人群中，單基因缺陷的發生率約為0.36％(7)。?

為了最小化例如DS等疾病中的風險，將這些侵入性但是確切的的檢測提供給通過一系列篩查標準而被鑒定為具有胎兒染色體異常最高風險的婦女。該組通常包括生產年齡在35歲以上并且在妊娠一期和二期所進行的胎兒超聲檢查和母體血清標記物篩查測試中出現異常應答的孕婦(8)。優選的妊娠一期的篩查，包括對血清中的PAPP-A(妊娠相關血漿蛋白A)、游離β-hCG(游離β-人絨毛膜促性腺激素)進行定量，以及頸項透明層的超聲檢查，具有約90％的DS檢出率，但是代價是具有顯著意義的5％假陽性率(8)。對一期篩查研究進行的最近匯總分析得出結論，在實踐中所能達到的靈敏度可能會顯著低于(約80-84％)所報道的靈敏度。這種表現不佳的問?題，特別是考慮到5％的篩查陽性率，總是會導致高比率的不必要且昂貴的侵入性驗證測試，并因此增加妊娠發展的風險。?

明顯的局限性是用于尋找替代策略的主要的社會、科學和經濟動機。后者由于DS發生率的上升而被強化，主要是由于懷孕時母體年齡增加的趨勢，而出生率并沒有相對等的增加(10)。美國婦產科醫師學會(American?College?of?Obstetricians?and?Gynecologists，ACOG)近期提出了指導原則，建議其成員對所有預期中的母親進行基因異常的檢測(11)，這進一步暗示了對于可安全地對胎兒基因狀況進行特異性診斷的非侵入性技術的需求未得到滿足。因此，非侵入性產前診斷的開發已經成為現代醫學中最具進取性爭議的領域之一(12)。預期候選策略會包含現有侵入性方法的所有優點，以使得能將它們能夠作為單獨運行的非侵入性診斷測試或被用作高精度的驗證測試以對當前篩查實踐中的大量假陽性進行分析(13)。此外，這種新的測試策略應當另外解決了分析、制造和操作中的復雜性，使得該新的方法提供了可靠、簡便和經濟有效的替代性方案。?

幾十年來，對于非侵入性替代方案的探索集中在對正常情況下可穿過胎盤屏障進入母體循環系統中的胎兒基因材料的分離、鑒定以及隨后的分析之上。自從1893年關于胎兒細胞檢測的首創性報道(14)以及稍晚一些的關于母體血液中胎兒無細胞DNA(15)和RNA(16)檢測的報道以來，有兩種基于對胎兒細胞或無細胞胎兒基因材料進行分析的有前途的方法受到了極大的關注。與無細胞的胎兒DNA或RNA相比，完整的胎兒細胞可以提供獲取對于檢測染色體異常來說重要的完整胎兒基因材料以及對胎兒基因狀況進行更全面評估(17)。由于在伴隨有染色體異常的母體中或在諸如先兆子癇等的疾病中胎兒細胞數目相對增加(18)，可靠的分離方法可能會基于胎兒細胞計數和/或細胞檢測信號定量而使其適合于新型非侵入性診斷方法的開發。?