[發明專利]體內ADCC模型

在審

• 申請號: 201280053302.4
• 申請日: 2012-10-29
• 公開（公告）號: CN103906842A
• 公開（公告）日: 2014-07-02
• 發明（設計）人: D·布羅伊斯泰特;C·格德斯;A·伊格萊希亞斯;P·烏馬納
• 申請（專利權）人: 羅切格利卡特公司
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;A01K67/027;C07K16/28;C07K14/705
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所 11247
• 代理人: 張莉;黃革生

技術領域

本發明的領域是包含人源化低親和性Fc-γ受體（FcgR）基因座的轉基因非人動物，包括包含用人低親和性FcgR基因替代內源性低親和性FcgR基因的轉基因非人動物，包括能夠表達四個功能性人低親和性FcgR基因的非人動物，和包括不表達內源性低親和性FcgR基因的非人動物。

背景技術

已經證明，治療性抗體（TherAbs）對于如贅生性疾病或自體免疫炎癥痛苦這樣的人類疾病的治療是高度有效的。常常，TherAbs的治療作用所基于的是腫瘤細胞的細胞毒性清除，這使得這些抗體制劑的效應子功能特性成為一個關鍵問題。鼠來源的TherAbs常常在所治療患者中導致免疫反應（抗-藥物抗體（ADA）反應）。盡管預期純粹人TherAbs實質性地減輕了ADA反應問題，但在進入人治療前其生物功效的可預測性在很大程度上仍然未得到解決。由于與新TherAbs研發相關的巨大成本，因此需要能夠在該過程的早期預測其功效的工具。通常在異種移植物試驗中測試抗腫瘤抗體藥物的體內功效。由此，首先將靶標人腫瘤接種于免疫缺陷小鼠中，通常為Scid或RAG突變體，并且使其生長，接著注射TherAbs。通過TherAbs消除人腫瘤的能力來確定TherAbs的功效。在該系統中，接種的癌細胞的破壞很大程度上依賴于由引入的（人）TherAbs在（鼠）天然免疫系統細胞上激活的效應子功能。

抗原-抗體復合物與不同免疫細胞表面上的補體（C）或Fc-受體（FcR）的結合引發抗體依賴性細胞介導的細胞毒性（ADCC），由此免疫系統的效應細胞活躍地裂解靶（腫瘤）細胞。補體依賴性細胞毒性（CDC）、巨噬細胞-介導的吞噬作用或細胞溶解（如通過自然殺傷細胞（NK）或粒細胞誘發的）有助于癌細胞的破壞。

然而，這些機制的功效在不同的物種中不同，并且甚至在相同物種的不同個體中也是不同的。特別地，盡管小鼠只具有兩個活化性低親和性FcR基因（Fcgr3和Fcgr4），但人具有四個活化性低親和性FcR基因（FCGR2A、FCGR2C、FCGR3A、FCGR3B）。此外，主要的功能性人FcR——FcγRIIIa（由FCGR3A基因編碼）——存在于NK細胞和巨噬細胞中，而其鼠同系物FcγR4在粒細胞和巨噬細胞中被發現，但在NK細胞中未發現。人粒細胞表達FCGR3B——在小鼠中沒有對應物的FcR。最后，低親和性小鼠Fcg3在巨噬細胞、NK細胞和粒細胞中表達，而其人同系物FcgR2a只在巨噬細胞和粒細胞中找到，同時人變體FcgR2c專門在NK細胞中表達，但只存在于20%人群中。因此，由于小鼠和人效應細胞中完全不同的FcgR表達，在小鼠異種移植物系統中評價人治療性抗體的生物功效，具有差的預測價值。由于鼠和人效應細胞與機制之間內在的差異，獲得的異種移植物試驗的數據對于TherAbs在小鼠中的功效比對于其在人中的功效，更有預測性。

迄今為止，已經研發了各種更為接近地模擬人效應細胞和-機制的體內模型。例如，已經產生了表達單個人FcgR基因的轉基因小鼠。然而，就細胞分布和表達水平兩者而言，這種小鼠模型只有部分與人類相當。看起來，低親和性FcgR基因的高保守性基因座（在人類和小鼠中都位于染色體1上）在基因內區段中包括調控元件，其是各FcgR基因忠實表達所需要的，并且不能與該局部遺傳環境脫離。

因此，另一種方法是，通過使用攜帶多達200kb基因組人DNA的轉基因細菌人造染色體（BAC），在轉基因小鼠中復制人表達模式。然而，在BAC轉基因小鼠中，表達人和內源性小鼠FcgR，導致異常升高的FcgR整體水平。此外，所得到的細胞分布是鼠和人表達模式的總和。

因此，仍然需要在非人動物中再現人FcgR基因表達的體內模型，以用于提高異種移植物試驗的預測潛能。

發明內容

本發明涉及具有人源化低親和性FcgR基因座的新轉基因非人動物。非人動物可以是任何非人動物。優選，非人動物是哺乳動物，更優選嚙齒動物，如大鼠或小鼠，最優選，非人動物是小鼠。在優選的實施方案中，所述非人動物是小鼠。

本文中提供了包含人低親和性FcgR基因替代內源性低親和性FcgR基因的轉基因非人動物，包括能夠表達四個功能性人低親和性FcgR基因的非人動物，并且包括不表達內源性低親和性FcgR基因的非人動物。在一個實施方案中，所述四個功能性人低親和性FcgR基因是FCGR2A、FCGR3A、FCGR2C和FCGR3B。