[發明專利]蛋白質的分泌產生方法

有效

• 申請號: 201280052867.0
• 申請日: 2012-10-25
• 公開（公告）號: CN103917656A
• 公開（公告）日: 2014-07-09
• 發明（設計）人: 鶴井典子;板屋寬;菊池慶實
• 申請（專利權）人: 味之素株式會社
• 主分類號: C12P21/02
• 分類號: C12P21/02;C12N15/09;C12R1/13;C12R1/15
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 羅天樂

1.一種產生異源蛋白質的方法，包括：

培養具有用于分泌表達異源蛋白質的基因構建體的棒狀桿菌型細菌；和

收集分泌產生的異源蛋白質，

其中所述基因構建體包含：在棒狀桿菌型細菌中發揮功能的啟動子序列，連接在該啟動子序列下游的編碼在棒狀桿菌型細菌中發揮功能的信號肽的核酸序列，以及連接在該編碼信號肽的核酸序列下游的編碼包含Gln-Glu-Thr的氨基酸序列與所述異源蛋白質的融合蛋白質的核酸序列，

條件是所述包含Gln-Glu-Thr的氨基酸序列不是由SEQ?ID?NO:96的1-14位或1-38位的氨基酸殘基組成的氨基酸序列。

2.權利要求1所述的方法，其中所述包含Gln-Glu-Thr的氨基酸序列是選自下述氨基酸序列(A)-(H)的氨基酸序列：

(A)Gln-Glu-Thr

(B)Gln-Glu-Thr-Xaa1(SEQ?ID?NO:102)

(C)Gln-Glu-Thr-Xaa1-Xaa2(SEQ?ID?NO:103)

(D)Gln-Glu-Thr-Xaa1-Xaa2-Xaa3(SEQ?ID?NO:104)

(E)由Gln-Glu-Thr與成熟CspB的4-7位的氨基酸殘基融合而構成的氨基酸序列，

(F)由Gln-Glu-Thr與成熟CspB的4-8位的氨基酸殘基融合而構成的氨基酸序列，

(G)由Gln-Glu-Thr與成熟CspB的4-17位的氨基酸殘基融合而構成的氨基酸序列，

(H)由Gln-Glu-Thr與成熟CspB的4-50位的氨基酸殘基融合而構成的氨基酸序列，

其中Xaa1是Asn、Gly、Thr、Pro或Ala，Xaa2是Pro、Thr或Val，且Xaa3是Thr或Tyr。

3.權利要求2所述的方法，其中所述包含Gln-Glu-Thr的氨基酸序列選自下組的氨基酸序列：Gln-Glu-Thr-Asn-Pro-Thr(SEQ?ID?NO:97)、Gln-Glu-Thr-Gly-Thr-Tyr(SEQ?ID?NO:98)、Gln-Glu-Thr-Thr-Val-Thr(SEQ?ID?NO:99)、Gln-Glu-Thr-Pro-Val-Thr(SEQ?ID?NO:100)、和Gln-Glu-Thr-Ala-Val-Thr(SEQ?ID?NO:101)。

4.權利要求1-3中任一項所述的方法，其中所述基因構建體在所述編碼包含Gln-Glu-Thr的氨基酸序列的核酸序列和所述編碼異源蛋白質的核酸序列之間還包含編碼用于酶消化的氨基酸序列的核酸序列。

5.權利要求4所述的方法，其中所述用于酶消化的氨基酸序列是因子Xa蛋白酶的識別序列，或者ProTEV蛋白酶的識別序列。

6.權利要求5所述的方法，其中所述蛋白酶的識別序列是SEQ?ID?NO:105或106中所示的氨基酸序列。

7.權利要求1-6中任一項所述的方法，其中所述在棒狀桿菌型細菌中發揮功能的信號肽是來源于棒狀桿菌型細菌的CspB的信號肽。

8.權利要求7所述的方法，其中所述CspB的信號肽具有SEQ?ID?NO:92中所示的氨基酸序列。

9.權利要求1-8中任一項所述的方法，其中作為培養對象的棒狀桿菌型細菌是屬于棒狀桿菌屬(Corynebacterium)或短桿菌屬(Brevibacterium)的細菌。

10.權利要求1-9中所述的方法，其中作為培養對象的棒狀桿菌型細菌是谷氨酸棒狀桿菌(Corynebacterium?glutamicum)或Corynebacterium?stationis。