[發明專利]改進的疫苗診斷

有效

• 申請號: 201280052231.6
• 申請日: 2012-08-10
• 公開（公告）號: CN103917874A
• 公開（公告）日: 2014-07-09
• 發明（設計）人: R.G.安肯鮑爾;L.D.尼爾森;N.L.奧伊恩;S-K.W.維爾科
• 申請（專利權）人: 佐蒂斯有限責任公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 丁藝

技術領域

本發明涉及用于區分(a)施用嵌合瘟病毒的動物與(b)被野生型牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)感染或用常規BVDV疫苗接種的動物的改進的方法和試劑盒。

背景技術

已經從若干馴養及野生動物種類中分離出包括牛病毒性腹瀉病毒(BVD病毒或BVDV)在內的瘟病毒(pestiviruses)。所鑒定的BVDV的宿主包括野牛、羚羊、馴鹿和各種鹿類，同時已經在長頸鹿和叉角羚中鑒定出獨特的瘟病毒種屬。BVDV是黃病毒科的小RNA病毒。其與作為綿羊的邊界病以及豬的經典豬霍亂的病原體密切相關。

特別是在牛中由BVDV引發的疾病廣泛散布而且經濟上能夠是破壞性的。牛中的BVDV感染可導致繁殖問題，并且能夠引發流產或早產。BVDV能夠透過懷孕的牛的胎盤，并可導致分娩出持續感染(PI)的小牛，其對病毒免疫耐受而且余生持續患病毒血癥。感染的牛還可表現出“粘膜病”，其特征是溫度升高、腹瀉、咳嗽和營養粘膜潰瘍。這些持續感染的動物在獸群中提供了病毒散布源以及粘膜病的進一步爆發，并且非常易于誘發造成腸道疾病或肺炎的微生物的感染。

目前可用的BVDV疫苗是含化學滅活的野生型病毒的那些疫苗，或者含修飾性活(ML)BVDV的那些疫苗。BVDV可通過在牛或豬細胞中反復傳代或者通過在病毒上提供溫度敏感型表型的化學誘導的突變來減弱。然而，現有的滅活和ML疫苗不允許在已接種動物和自然感染的動物之間進行區分。

可能含有野生型病毒中不存在的其他抗原決定子或者缺乏野生型病毒中存在的抗原決定子的“標記”疫苗可以是用于控制該領域中的BVDV感染的有效工具。美國專利申請2010/0360055(Luo等，通過參考以其整體并入本文)描述了后者，即一種基于嵌合瘟病毒疫苗的疫苗，其中BVDV的E^rns蛋白質被來自叉角羚瘟病毒的E^rns蛋白質置換。該嵌合瘟病毒以UC25548保藏于并賦予保藏號PTA-9939。借助適當的診斷測定，利用該嵌合瘟病毒將允許區分施用該病毒的動物與感染野生型BVDV或接種常規BVDV疫苗的動物。

發明內容

在一個實施方式中，提供了一種用于測定動物是否暴露于BVDV或用常規BVDV疫苗免疫接種的方法，其中所述感染了BVDV或免疫接種了常規BVDV疫苗的動物具有特異性結合存在于BVDV中但是不存在于嵌合瘟病毒中的至少一個E^rns表位的抗體，該嵌合瘟病毒不再表達來自BVDV的E^rns蛋白質，但在BVDV中表達叉角羚瘟病毒的E^rns蛋白質。

在一個實施方式中，提供了一種用于測定特異性結合BVDV?E^rns蛋白質的抗體存在與否的方法，所述方法包括下述步驟：

a)從動物獲得血清樣品；

b)用叉角羚瘟病毒E^rns蛋白質或其片段溫育所述片段；

c)檢測所述樣品中所述抗體的存在與否。

在另一實施方式中，提供了用于測定動物是否暴露于BVDV或用常規BVDV疫苗免疫接種的診斷試劑盒，所述試劑盒包括能夠檢測存在于BVDV中但不存在于嵌合瘟病毒中的至少一個E^rns表位的抗體的試劑，所述嵌合瘟病毒不再表達來自BVDV的E^rns蛋白質，但在BVDV中表達叉角羚瘟病毒的E^rns蛋白質。

在進一步的實施方式中，提供了抗體的用途，所述抗體結合BVDV或常規BVDV疫苗中存在的表位，但是該表位在嵌合瘟病毒中不存在，所述嵌合瘟病毒不再表達來自BVDV的E^rns蛋白質，但在BVDV中表達叉角羚瘟病毒的E^rns蛋白質。

在另一實施方式中，提供了一種用于測定動物是否具有特異性結合BVDV?E^rns蛋白質的抗體的方法，所述方法包括下述步驟：

a)從動物獲得血清樣品；

b)用叉角羚瘟病毒E^rns蛋白質或其片段溫育所述片段；

c)檢測所述動物中所述抗體的存在與否。

在另一實施方式中，提供了一種用于測定特異性結合BVDV?E^rns蛋白質的抗體存在與否的方法，其中用叉角羚瘟病毒E^rns蛋白質或其片段溫育所述樣品的步驟在檢測所述樣品中所述抗體存在與否的步驟之前進行。