[發明專利]使得在細菌中能夠更快地利用蔗糖的變體蔗糖轉運蛋白多肽

無效

• 申請號: 201280039390.2
• 申請日: 2012-08-16
• 公開（公告）號: CN103717611A
• 公開（公告）日: 2014-04-09
• 發明（設計）人: Q.陳;Q.程;J.P.賴;K.呂布林-賈斯
• 申請（專利權）人: 納幕爾杜邦公司
• 主分類號: C07K14/195
• 分類號: C07K14/195;C07K14/43;C12N15/31;C12N15/70;C12P7/20;C12P7/52
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 李慧惠;李炳愛

1.變體蔗糖轉運蛋白多肽，所述多肽具有：

(a)基于Clustal?W比對方法，與如SEQ?ID?NO：24所示的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列，并且具有至少一種選自下列的氨基酸改變：

(i)在位置61處將亮氨酸變為脯氨酸；

(ii)在位置159處將苯丙氨酸變為亮氨酸；

(iii)在位置162處將甘氨酸變為半胱氨酸；

(iv)在位置169處將脯氨酸變為組氨酸；

(v)在位置61處將亮氨酸變為色氨酸；

(vi)在位置61處將亮氨酸變為組氨酸；

(vii)在位置61處將亮氨酸變為苯丙氨酸；以及

(viii)在位置61處將亮氨酸變為酪氨酸；或

(b)基于Clustal?W比對方法，與如SEQ?ID?NO：44所示的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列，并且從N-末端具有402至407個氨基酸的長度；或

(c)基于Clustal?W比對方法，與如SEQ?ID?NO：44所示的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列，并且從N-末端具有402至407個氨基酸的長度，并且具有至少一種(a)的氨基酸改變。

2.細菌，所述細菌在其基因組中或在至少一個重組構建體上包含：

(a)編碼變體蔗糖轉運蛋白多肽的核苷酸序列，所述多肽具有：

(i)基于Clustal?W比對方法，與如SEQ?ID?NO：24所示的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列，并且具有至少一種選自下列的氨基酸改變：

(A)在位置61處將亮氨酸變為脯氨酸；

(B)在位置159處將苯丙氨酸變為亮氨酸；

(C)在位置162處將甘氨酸變為半胱氨酸；

(D)在位置169處將脯氨酸變為組氨酸；

(E)在位置61處將亮氨酸變為色氨酸；

(F)在位置61處將亮氨酸變為組氨酸；

(G)在位置61處將亮氨酸變為苯丙氨酸；以及

(H)在位置61處將亮氨酸變為酪氨酸；或

(ii)基于Clustal?W比對方法，與如SEQ?ID?NO：44所示的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列，并且從N-末端具有402至407個氨基酸的長度；或

(iii)基于Clustal?W比對方法，與如SEQ?ID?NO：44所示的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列，并且從N-末端具有402至407個氨基酸的長度，并且具有至少一種(i)的氨基酸改變；以及

(b)編碼具有蔗糖水解酶活性的多肽的核苷酸序列；

其中(a)和(b)各自可操作地連接至相同的或不同的啟動子，進一步地，其中所述細菌以比包含具有如SEQ?ID?NO：24所示的氨基酸序列的野生型蔗糖轉運蛋白多肽的細菌更高的速率代謝蔗糖。

3.根據權利要求2所述的細菌，其中所述具有蔗糖水解酶活性的多肽歸類為EC3.2.1.26或EC2.4.1.7。

4.根據權利要求2所述的細菌，所述細菌在其基因組中或在至少一個重組構建體上還包含編碼具有果糖激酶活性的多肽的核苷酸序列。

5.根據權利要求4所述的細菌，其中所述具有果糖激酶活性的多肽歸類為EC2.7.1.4、EC2.7.1.3或EC2.7.1.1。

6.根據權利要求2所述的細菌，其中所述細菌選自下列屬：埃希氏菌屬(Escherichia)、克雷伯氏菌屬(Klebsiella)、檸檬酸桿菌屬(Citrobacter)和氣桿菌屬(Aerobacter)。

7.根據權利要求6所述的細菌，其中所述細菌是大腸桿菌(Escherichia?coli)。

8.根據權利要求2所述的細菌，其中所述細菌是產生1，3-丙二醇、甘油和／或3-羥基丙酸的重組細菌。

9.由蔗糖制備甘油、1，3-丙二醇和／或3-羥基丙酸的方法，包括：

a)在蔗糖存在下培養權利要求8的重組細菌；以及

b)回收產生的甘油、1，3-丙二醇和／或3-羥基丙酸。