[發明專利]制備人松弛素-2的方法

無效

• 申請號: 201280037281.7
• 申請日: 2012-08-03
• 公開（公告）號: CN103764674A
• 公開（公告）日: 2014-04-30
• 發明（設計）人: W-G·福斯曼;T·德斯徹特齊格;L·施坦德克;A·齊格拉杰;J·赫希
• 申請（專利權）人: 法瑞斯生物技術有限公司
• 主分類號: C07K14/64
• 分類號: C07K14/64
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 馬莉華;崔佳佳

本專利申請涉及用于全合成松弛素-2的化學方法，其經藥物處理(galenically?process)成高純度形式，供作為藥物使用。

松弛素-2是屬于胰島素家族天然存在的肽激素(Schwabe和McDonald1977；Rinderknecht和Humbel1978)，可以從人體血流中分離(Wilkinson和Bathgate2007)。然而，這將意味著巨大的消耗，不能獲得理想的和想要的產率，另外將難以提供可比的質量和純度的材料。

松弛素-2在人體內的生理功能是控制心血管和/或腎系統、以及血管的血管舒張調節(Sherwood2004)。它與G蛋白偶聯受體相互作用(參見圖1）。

直至20世紀90年代，松弛素被認為僅是生育和孕激素：在懷孕的頭三個月達到其最高血漿水平，并在胚胎著床和泌尿生殖結締組織重建中發揮重要作用。

自2000年以來，科學家們已經研究了松弛素的心血管效應，尤其是在慢性心臟衰竭的作用。

研究已經首次表明存在組成型表達的內源性心臟和血管松弛素系統(Dschietzig等，2006)。在心臟衰竭中，心肌松弛素系統是處于受激狀態，因此，發現循環松弛素水平顯著增加，當血流動力學改善時其迅速下降。

因此，得到的結果顯示1)存在功能相關的內源性心血管松弛素系統和2)心臟衰竭時松弛素的代償作用。

如同胰島素，松弛素-2由通過兩個二硫鍵互連的兩個不同多肽鏈(A和B)構成(Bourell等，1990)。

加工的人松弛素-2的氨基酸序列

A鏈:

pGlu-Leu-Tyr-Ser-Ala-Leu-Ala-Asn-Lys-Cys-Cys-His-Val-Gly-Cys-Thr-Lys-Arg-Ser-Leu-Ala-Arg-Phe-Cys

線形A鏈的分子量:2656.2道爾頓(理論上)

B鏈:

Asp-Ser-Trp-Met-Glu-Glu-Val-Ile-Lys-Leu-Cys-Gly-Arg-Glu-Leu-Val-Arg-Ala-Gln-Ile-Ala-Ile-Cys-Gly-Met-Ser-Thr-Trp-Ser

線形B鏈的分子量:3312.9道爾頓(理論上)

人松弛素-2分子內的二硫鍵：

A鏈內：

Cys-10和Cys-15

連接A鏈和B鏈：

A鏈的Cys-11和B鏈的Cys-11

A鏈的Cys-24和B鏈的Cys-23

二硫鍵連接分子的分子量：5963.1道爾頓(理論上)

5962.5(ESI-MS)

至今，僅能通過重組合成制備純度足夠的松弛素-2和松弛素家族的其他肽，但對于肽來說該方法繁瑣且產率低(Breece等.,1995;Tang等.,2003).

至今，全化學合成一直伴隨著大量反應步驟和高支出消耗，因此沒有獲得高產率(Bullesbach和Schwabe1991;Samuel等.,2007;Barlos等.,2010)。

對于藥物制備，需要開發優化的合成策略，該策略能夠符合所有情況下對于純度、產率、再現性、經濟效率和消耗的需求。

傳統的合成策略是基于在松弛素-2分子內選擇性引入三個二硫鍵，一方面這意味著巨大的化學試劑消耗，另一方面需要色譜純化過程，這是在產生各二硫鍵后所必須的。

進而預計會導致產物的巨大物質損失。

針對產物的質量和經濟方面，迄今為止已經實施的合成策略是不夠的。

至今，化學合成描述為太難，從而無法生產市售的產品。迄今為止，化學合成已經與氨基酸缺失所致的高雜質水平以及和高成本相關。因此，為了應對不斷增加的問題，需要提供高純度形式的松弛素-2從而獲得無副作用的藥物制劑(galenic?preparation)。

不同的制造商實施松弛素-2的重組合成，為臨床前和臨床檢驗和研究提供產品。但是，生產的消耗阻礙經濟上合理的開發。