[發明專利]上皮性卵巢癌標志物檢測用抗體和上皮性卵巢癌判定方法

無效

• 申請號: 201280037227.2
• 申請日: 2012-07-26
• 公開（公告）號: CN103842504A
• 公開（公告）日: 2014-06-04
• 發明（設計）人: 曾我部萬紀;久保田智巳;栂谷內晶;池原讓;成松久;澤木弘道;中西速夫;中西透
• 申請（專利權）人: 獨立行政法人產業技術綜合研究所
• 主分類號: C12N15/09
• 分類號: C12N15/09;C07K16/40;C12N5/10;G01N33/573;G01N33/574;C12N9/10;C12P21/08
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 金世煜;苗堃

技術領域

本發明涉及用于檢測上皮性卵巢癌標志物的抗β1,3-N-乙酰基葡萄糖胺轉移酶3抗體、產生上述抗體的雜交瘤以及使用上述抗體的上皮性卵巢癌判定方法。

背景技術

卵巢癌與婦科癌中的乳癌、子宮癌相比是發生率低的癌，但是，近年其發生率、死亡率均有增加的傾向。通常由于卵巢癌基本沒有發病初期階段的主觀癥狀，所以發現時大多其癥狀已經發展，因此，其預見性不良，成為婦科癌中死亡率最高的疾病。已知卵巢癌因發病部位不同，包括了由卵巢的表層上皮細胞產生的表層上皮性·間質性瘤（以下，稱為“上皮性卵巢癌”）、由胚細胞產生的胚細胞瘤等。其中上皮性卵巢癌在全部卵巢癌中占約90%，特別是在40歲以后的中老年較為多見。因此，在早期階段發現上皮性卵巢癌在該疾病的治療上變得重要。

但是，由于卵巢是不與外界相接的臟器，不能像子宮那樣不進行開腹或者穿孔即可通過內視鏡進行檢查或采取細胞。此外，上皮性卵巢癌如果不是在癥狀發展而卵巢出現肥大后，則通過觸診而發現其通常是困難的。因此，通常的檢查·診斷方法中將上皮性卵巢癌漏診的情況較多。雖然回聲檢查、MRI、CT等對上皮性卵巢癌的早期發現比較有效，但是存在檢查自身是大規模的且檢查費用是高額的，以及良性、惡性的診斷精度不是很高的問題。

鑒于上述背景，近年來腫瘤標志物受到矚目。腫瘤標志物是指癌細胞產生的物質、或與癌細胞反應由周邊的細胞產生的物質，由于其在體液中的存在量反映了腫瘤的有無、其預兆，因此成為癌判定和治療方針決定等的鑒別子。此外，由于能夠從體液進行檢查，所以具有侵襲性比較低、檢查也簡便，費用也低廉等優點。

作為上皮性卵巢癌的腫瘤標志物，目前為止，已知由CA125、CA602、CA130、CA72-4、CA546、CA19-9、STN等蛋白質構成的腫瘤標志物（非專利文獻1～6）。使用這些腫瘤標志物的癌判定方法中，通常是，測定健康人和上皮性卵巢癌患者的該腫瘤標志物在血清中的濃度，基于其量差來判定有無罹患癌。

但是，這些蛋白質包含如下特異性的問題，即，像CA125這樣在子宮內膜癥等癌以外的婦科良性疾病中顯示陽性，像CA72-4、CA19-9和STN這樣在卵巢癌以外的胃、大腸等各種消化器官癌中顯示陽性等。此外，由于上皮性卵巢癌因組織類型不同進一步分類為漿液性、明細胞性、粘液性、和類內膜性，標志物的反應性因組織類型不同而不同，偶有發現不能完全反映癌的發展的問題。例如，CA125、CA602和CA546等卵巢癌標志物中，由于在粘液性卵巢癌中的陽性率低，所以存在即使該組織類型變為發展期也難以被檢測出來等的問題。

專利文獻1公開了將源自癌相關人群的半乳糖轉移酶（GAT）作為腫瘤標志物的、用于診斷以卵巢癌為代表的癌的單克隆抗體，產生其的雜交瘤以及使用其的樣本中的源自癌相關人群的半乳糖轉移酶的測定方法。此外，專利文獻2公開了將糖轉移酶即β1,3-半乳糖轉移酶5、β1,3-半乳糖轉移酶4、和N-乙酰基葡萄糖胺6-O-硫酸轉移酶2作為腫瘤標志物的在早期檢測婦科癌的方法。上述專利文獻1和2中作為腫瘤標志物使用的糖轉移酶，是合成與糖蛋白質、糖脂或蛋白多糖等結合的糖鏈的酶，通常作為局限于高爾基體的膜蛋白質而固定在高爾基體膜上。因此，沒有分泌到細胞外，因而在健康人的體液中基本沒有被檢測出來。但是，卵巢癌中，已知通過某種蛋白酶表達量的增加，糖轉移酶被異常切斷，并被排出到細胞外。其結果是，在體液中檢測到有意義的量的糖轉移酶片段。

專利文獻1中的糖轉移酶、β1,4-半乳糖轉移酶在糖轉移酶中表達量非常高，向細胞外的分泌量也較多。因此，健康人也顯示約200ng/mL的血中濃度，僅通過酶活性無法判別良性疾病和癌。因此，專利文獻1中，著眼于在卵巢癌細胞培養上清和卵巢癌患者腹水中存在被異常切斷的該糖轉移酶片段，通過使用僅識別該片段的抗體，嘗試構筑卵巢癌特異性高的測定體系。但是，利用該測定體系的市售的臨床診斷試劑盒中，存在即使健康女性也顯示陽性的例子（非專利文獻7），因此，GAT現在主要作為卵巢癌的復發監控來使用，基本不將其用作早期發現用的標志物。

專利文獻2公開了以下測定法，即基于通常癌組織中以糖轉移酶為代表的多種蛋白質的表達出現亢進或者降低的報告，嘗試從婦科癌患者血中檢測成為候補標志物的蛋白質，結果發現2種糖轉移酶測定的有用性。但是，這種情況下，報告了這些糖轉移酶的表達或合成產物，與其說是與婦科癌相關，倒不如說是與消化器官癌相關。之后，盡管確認在卵巢癌細胞株有表達（非專利文獻8），但是并沒有卵巢癌或者其它婦科癌與消化器官癌的表達量的比較研究的報告。