[發明專利]從胎兒組織制備親代細胞庫

在審

• 申請號: 201280034452.0
• 申請日: 2012-07-10
• 公開（公告）號: CN103874763A
• 公開（公告）日: 2014-06-18
• 發明（設計）人: L·A·勞倫-阿普爾蓋特
• 申請（專利權）人: 佛多斯大學醫學研究中心(CHUV)
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077;C12N5/073
• 代理公司: 北京北翔知識產權代理有限公司 11285
• 代理人: 蔡倫;張廣育

技術領域

本發明涉及在體外從由胎兒骺組織、胎兒跟腱組織和胎兒皮膚組織組成的胎兒組織制備親代細胞庫（PCB）的方法，所述方法使用快速機械原代細胞培養選擇要用于傷口和組織修復方法的細胞類型。

背景技術

細胞療法正成為令人感興趣的用于修復、恢復或改善組織功能的醫學療法的附加方法，尤其是與傳統的外科技術結合。一些細胞選擇在患者中更適合細胞療法。可用每種最終細胞類型的優點和缺點評估來自所有發育年齡的動物和人的組織選擇。目前基于人細胞的療法的限制因素與如下方面的技術局限有關：細胞增殖能力（簡單培養條件下）、維持原代人細胞培養物的分化表型、傳染病的傳播以及取決于其分離步驟的所選擇的細胞群的一致性和穩定性。培養的來自一次器官捐獻的原代胎兒細胞滿足了開發治療產品的迫切且嚴格的技術方面。來自一個胎兒器官捐獻的原始細胞庫和工作細胞庫可在短時間內形成并且可在建立細胞庫的所有階段進行安全性測試。

細胞療法已經被提議作為外科操作和特定組織的組織工程的侵入性較小的替代方案或聯合療法。已經研究發現若干種細胞類型可用于細胞療法：胚胎干細胞（ES）、臍帶細胞、胎兒細胞和成體干細胞（來自骨髓-造血干細胞或HSC和骨髓干細胞或MSC）以及脂肪組織細胞、血小板細胞、胎盤細胞和羊水細胞。對于在組織工程中的任何應用而言，細胞源和細胞類型是基本方面。對于有各種優缺點的具體療法，每種細胞類型需要不同的方法來操縱其分化和自我更新能力。

對胎兒細胞的重要性（尤其是在開發必需疫苗中）沒有許多公共知識的情況下，胎兒細胞已經廣泛地在生物學和藥學中使用了很多年。胎兒細胞是具有高的擴增（expansion）、再生和低免疫原性性質的分化的細胞。它們可以從發育9周后的胚胎期后的胎兒組織分離。胎兒皮膚細胞為有效且安全的細胞療法和組織工程提供了理想的解決辦法，幾個理由包括：a)來自一次器官捐獻的細胞擴增能力；b）最小的細胞生長需求；c）對用于遞送的生物材料的適應；和d）對氧化性應激的抗性。胎兒皮膚細胞具有大量擴增的可能性，因為其僅需要一次器官捐獻（1-4cm²組織）即可生成足夠的冷凍細胞用以產生能夠進行數十萬次治療的庫（即，對于皮膚來說，可從一個專用的細胞庫產生超過350億個9×12cm胎兒皮膚結構體）。同樣，與干細胞或間充質細胞類型相比，細胞培養要求最低。因為胎兒皮膚細胞是已經分化的并且不需要進行定向或改變，所以細胞培養和擴增不需要通常所必需的大量的額外生長因子。對于建立細胞庫，為了避免可傳播的病毒性、真菌性或細菌性疾病而對供體進行精心篩選并對供體及培養的細胞進行廣泛的篩選，使得可安全且可靠地利用胎兒細胞以用于治療用途。另外，不像新生兒的、幼小的或成體的細胞，胎兒細胞尤其良好地適應于能夠有效且簡單地遞送至患者的生物材料。已經表明，來自供體（新生兒至成體）的細胞不能夠有效地整合至多種生物材料中，并且一些生物材料事實上對所述細胞是毒性的。的確，支架對于組織工程來說是非常重要的，但是細胞類型是最可能的限制性因素。對于處理用于臨床遞送的終產物來說，所述終產物的同源分布和快速形成是主要的顯著優點。對于自體移植或目前的可市購產品來說，當需要長的培養期時，存在不可忽視的污染風險增加。同樣重要的是擁有一致且容易重復的方法。通過用胎兒細胞形成一致的細胞庫，可消除多種風險因素以為患者帶來安全且有效的基于人細胞的療法。

對于基于細胞的產品，建議的關鍵要素包括同一性、純度、無菌性、安全性和有效性。總之，新的條例對要用于臨床試驗和治療的基于細胞的產品的產生和用于產生其的環境提出了嚴格的標準。目前基于人細胞的療法的限制因素與如下方面的技術局限有關：細胞增殖能力（在簡單培養條件下）、維持原代人細胞培養的分化表型、傳染病的傳播以及取決于其分離步驟的所選擇的細胞群的一致性和穩定性。培養的來自一次器官捐獻的原代胎兒細胞符合開發治療產品的迫切且嚴格的技術方面。來自一個胎兒器官捐獻的原始和工作細胞庫可在短時間內形成并且可在建立細胞庫的所有階段進行安全性測試。對于治療用途來說，在體外擴增（out-scaling）的過程中可以使用胎兒細胞直到其壽命的三分之二，并且可確保若干生物學特性的一致性，包括蛋白質濃度、基因表達和生物活性。