[發明專利]核酸擴增裝置和核酸分析裝置

有效

• 申請號: 201280031142.3
• 申請日: 2012-05-31
• 公開（公告）號: CN103635568A
• 公開（公告）日: 2014-03-12
• 發明（設計）人: 前田耕史;杉山千枝;莊司義之;石澤雅人;佐野稔
• 申請（專利權）人: 株式會社日立高新技術
• 主分類號: C12M1/00
• 分類號: C12M1/00
• 代理公司: 北京銀龍知識產權代理有限公司 11243
• 代理人: 鐘晶;於毓楨

技術領域

本發明涉及搭載有多個能夠單獨控制溫度的溫度控制模塊的核酸擴增裝置、和在裝置的一部分使用該核酸擴增裝置的核酸分析裝置。

背景技術

溫度控制模塊需要將其溫度絕對值正確地控制在目標溫度。以往，在溫度控制模塊的溫度絕對值的測定中，采用下述方法：使用校正完的溫度測定探頭，在測定溫度與目標溫度不同的情況下，以使測定溫度與目標溫度一致的方式進行修正。一般而言，使用校正完的溫度測定探頭的溫度校正的極限精度為±0.25℃。

然而，存在多個能夠單獨控制溫度的溫度控制模塊搭載于1個裝置的情況。此時如果也使用校正完的溫度測定探頭單獨修正各溫度控制模塊的溫度，則修正結束后，各溫度控制模塊的溫度控制精度為±0.25℃。因此，理論上溫度控制模塊間的溫度差最大為0.5℃。

此外，還提出了在溫度控制模塊的溫度校正中使用利用了熱變色性液晶的試驗片的方法（參照例如專利文獻1。）。該方法的原理是，將熱變色性液晶混入與流體試樣接觸的試驗片，通過檢測將試驗片控制于試驗溫度時液晶的變色，對試驗片的溫度進行校正。

現有技術文獻

專利文獻

專利文獻1:日本特開平10-206411號公報

專利文獻2:日本特開2010-51265號公報

專利文獻3:日本特開平05-317030號公報

專利文獻4:日本特開2010-166823號公報

專利文獻5:日本特表2003-525621號公報

專利文獻6:日本特表2005-519642號公報

專利文獻7:日本特開2008-278896號公報

專利文獻8:日本特開平03-131761號公報

非專利文獻

非專利文獻1:JOURNAL?OF?CLINICAL?MICROBIOLOGY（臨床微生物學雜志）,Feb.2009,p.435-440

發明內容

發明所要解決的課題

因而，在通過溫度控制模塊進行溫度管理的反應中，需要特別精密的溫度控制。例如伴隨聚合酶鏈反應（PCR：Polymerase?Chain?Reaction）、高分辨率熔解（HRM：High?Resolution?Melting）分析的反應。

PCR法為下述核酸擴增方法：通過交替重復進行n次(1)95℃的熱變性溫度、(2)約55℃～65℃左右的退火溫度、(3)延伸反應溫度（以下稱為“溫度循環”。），使作為目標的核酸序列擴增2n倍。

退火溫度和延伸反應溫度根據目標序列的不同而不同，該溫度要求的精度一般為±0.5℃以內。不過，溫度的精確性和再現性越高，則DNA的擴增效率和擴增再現性越高。

該擴增效率和擴增再現性是影響實時PCR（Real?time?PCR）法的定量精度的重要因素。其中，實時PCR法是通過使用熒光染料來實時測定由PCR帶來的擴增，從而由其擴增率（循環次數）對反應液中的核酸量進行定量的方法。

以往，在利用實時PCR法進行的DNA的定量中，使用在用1個溫度控制模塊進行溫度管理的空間內配置有多個反應容器（孔）方式的實時PCR裝置。在這樣的多個反應容器（孔）用1個溫度控制模塊進行溫度管理的情況下，可以將多個反應容器（孔）間的溫度差抑制至±0.2℃以下。

近年來，提出了具有多個溫度控制模塊的實時PCR裝置。該實時PCR裝置能夠單獨對多個溫度控制模塊進行溫度控制，可以同時實行多個溫度循環。當然，在這種裝置中，多個反應容器（孔）之間要求與僅使用1個溫度控制模塊時同等水平的溫度控制精度。

另一方面，HRM解析是下述分析方法：使通過實時PCR法擴增的擴增產物的溫度在約60℃至95℃的范圍內，以0.1℃以下的分辨率進行熒光測定，從而確定擴增產物的熔解溫度（擴增的雙鏈核酸的兩條鏈結合熔解的溫度）。

已知該熔解溫度根據擴增序列的不同而不同，理論上，即使是1個堿基的差異也會不同。通過該分析法，可以從混有多個不同序列的擴增反應液對各個序列的核酸進行分離并檢測。

另外，對于對設置于多個反應容器（孔）的樣品組的熔解溫度之差進行比較的目的而言，反應容器（孔）間的溫度再現性越高越好，該分析法要求的反應孔間的溫度再現性為±0.1℃以下。