[發(fā)明專利]酶功能改變方法及其突變體

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201280030627.0
• 申請日: 2012-06-27
• 公開（公告）號: CN103717734A
• 公開（公告）日: 2014-04-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 吉田慎一;平良俊一;西八條正克;野尻增俊;川野茂
• 申請（專利權(quán)）人: 株式會社鐘化
• 主分類號: C12N15/09
• 分類號: C12N15/09;C07H21/02;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N5/10;C12N9/04;C12P19/32
• 代理公司: 北京集佳知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 金世煜;趙曦

1.一種蛋白質(zhì)，屬于中鏈脫氫酶/還原酶家族，并具有選自下述的（a）～（d）中的至少一種氨基酸殘基：

（a）與序列號1的Asp-201在立體結(jié)構(gòu)上同等位置的氨基酸殘基是Ala或Ser，

（b）與序列號1的Lys-202在立體結(jié)構(gòu)上同等位置的氨基酸殘基是Arg，

（c）與序列號1的Lys-203在立體結(jié)構(gòu)上同等位置的氨基酸殘基是Ser，以及，

（d）與序列號1的Ala-206在立體結(jié)構(gòu)上同等位置的氨基酸殘基是Lys。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白質(zhì)，其由與序列號1所示的氨基酸序列具有85%以上的序列同源性的氨基酸序列構(gòu)成。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的蛋白質(zhì)，其中，由在序列號1所示的氨基酸序列中導(dǎo)入有選自下述的（e）～（h）中的至少一種突變的氨基酸序列構(gòu)成：

（e）將Asp-201置換為Ala或Ser，

（f）將Lys-202置換為Arg，

（g）將Lys-203置換為Ser，以及，

（h）將Ala-206置換為Lys。

4.根據(jù)權(quán)利要求1～3中任一項所述的蛋白質(zhì)，其由序列號2～8中任一項所述的氨基酸序列構(gòu)成。

5.由編碼權(quán)利要求1～4中任一項所述的蛋白質(zhì)的堿基序列構(gòu)成的DNA。

6.一種DNA，選自以下（A）、（B）以及（C）：

（A）由序列號25～31中的任一個所述的堿基序列構(gòu)成的DNA，

（B）與包含與序列號25～31中的任一個所述的堿基序列互補的堿基序列的DNA在嚴格條件下雜交、且由編碼具有氧化還原酶活性的蛋白質(zhì)的堿基序列構(gòu)成的DNA，

（C）與序列號25～31中的任一個所述的堿基序列具有85%以上的序列同源性、且由編碼具有氧化還原酶活性的蛋白質(zhì)的堿基序列構(gòu)成的DNA。

7.一種載體，包含權(quán)利要求5或6所述的DNA。

8.一種轉(zhuǎn)化體，是用權(quán)利要求7所述的載體轉(zhuǎn)化宿主細胞而得到的。

9.權(quán)利要求8所述的轉(zhuǎn)化體的培養(yǎng)物。

10.一種氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸的制造方法，包括如下工序：用權(quán)利要求1～4中任一項所述的蛋白質(zhì)，使還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸進行變換，得到氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸。

11.一種還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸的制造方法，包括如下工序：用權(quán)利要求1或2所述的蛋白質(zhì)，使氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸進行變換，得到還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸。

12.一種還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸的制造方法，通過使還原酶作用于由權(quán)利要求10所述的方法得到的氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸來進行。

13.一種氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸的制造方法，通過使氧化酶作用于由權(quán)利要求11所述的方法得到的還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸來進行。

14.根據(jù)權(quán)利要求10～13中任一項所述的制造方法，其特征在于，利用權(quán)利要求8所述的轉(zhuǎn)化體或權(quán)利要求9所述的培養(yǎng)物。

15.通過權(quán)利要求10～14中任一項所述的制造方法制造的化合物。