[發明專利]用于特異性識別人肝羧酸酯酶1的單克隆抗體、生成單克隆抗體的雜交瘤細胞株及其用途

有效

• 申請號: 201280029813.2
• 申請日: 2012-04-17
• 公開（公告）號: CN104066749A
• 公開（公告）日: 2014-09-24
• 發明（設計）人: 白隆基;羅瑾
• 申請（專利權）人: 延世大學校產學協力團
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C07K16/40;C12N5/16;G01N33/574;C07K1/14
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 黎艷;胡杰

技術領域

本發明涉及用于特異性識別人肝羧酸酯酶1的單克隆抗體、生成所述抗體的雜交瘤細胞株及其用途，該單克隆抗體用于從人體臨床標本如組織和血液中客觀地分析出人肝羧酸酯酶1的表達水平。

背景技術

人羧酸酯酶(hCE)可主要被分為具有不同特性和結構的異構體，如人羧酸酯酶1(hCE1)、人羧酸酯酶2(hCE2)和人羧酸酯酶3(hCE3)(Imai T,Drug Metab Pharmacokinet.,vol.21,pp.173-185,2006)。hCE1為一般在肝臟中被生物合成的酶，并能識別親水性分子的酰基而分解攝入到組織內的化學物質。然而，hCE2為一般在腸內被表達的酶，是與hCE1的同源率為47％的獨立蛋白質，而且與攝入到腸內的親水性分子的酰基反應。hCE3為一般在大腦中被表達的酶，同時也是與hCE1的同源率為50％的獨立蛋白質。

肝-羧酸酯酶1是一種在肝、腸、腎、肺、心臟或巨噬細胞中被表達的酶，但在肝中的表達比其他地方高出10～100倍。所述肝-羧酸酯酶1具有三種主要作用：第一，它具有外來物質代謝功能，其通過改變非活性藥物的酯或酰胺結構，將攝入到人體中的非活性藥物轉化成活性物質。例如，洛伐他汀(lovastatin)可被轉化成有活性形式來降低膽固醇，還用來將在體內有毒性的可卡因和海洛因分別轉化成無毒的可卡乙堿和嗎啡。第二，根據需要它通過分解和組合體內的膽固醇和脂肪酸的酯結構來調節膽固醇代謝，以及第三，它可以通過直接與蛋白質，即與可識別內質網中巨噬細胞免疫的C-反應蛋白(CPR)結合而調節功能(Redinbo MR.,Biochem.Soc.Trans.,31,pp.620-624,2003；Redinbo MR.,Drug Discov.Today.,10,pp.313-325,2005)。肝-羧酸酯酶1的另一特性是，在由化學物質引發肝癌的小鼠的肝微粒體中其酶活性會大幅下降(Maki T.,Jpn.J.Cancer Res.,82,pp.800-806,1991)，但尚未發現其機制。

至今，通過使用酯酶的非特異性底物，如磷酸對硝基苯酯或乙酸對硝基苯酯，來分析體內肝-羧酸酯酶1的活性程度并使之作為酶滴定值。根據此方法，無法測定單獨肝-羧酸酯酶1的特異性活性，因為在血液中具有酯酶功能的白蛋白、膽堿酯酶、丁酰膽堿酯酶等也有相同的活性(Li B.,Niochem.Pharmacol.,70,pp.1673-1684,2005)。因此，需要一種在短時間內能夠從大量的標本中有選擇地并有效地分析肝-羧酸酯酶1蛋白的方法，這種方法就 是酶免疫測定法。酶免疫測定法是一種通過抗體與目標蛋白質(抗原)的結合反應來誘導抗原-抗體結合、并在結合于酶上的抗體與底物間形成的復合反應中由結合度所產生的顯色或熒光顯色來定量臨床標本中目標蛋白質的方法。

最近，本發明人證明了在人血漿中存有肝-羧酸酯酶1，在肝癌組織中肝-羧酸酯酶1的表達水平與正常的肝組織中肝-羧酸酯酶1的表達水平相比有下降，但在肝癌患者的血漿中肝-羧酸酯酶1的表達水平比正常人的血漿中肝-羧酸酯酶1的表達水平平均增長2.8倍或更多(Na K.et al.,Proteomics.9,pp.3989-3999,2009)。然而，所述實驗中使用的肝-羧酸酯酶1的抗體是市面上可見的多克隆抗體(Abcam,ab1875)，而且非特異性蛋白質可以與之結合，此外其免疫沉淀反應的有效性會有下降。

發明內容

技術問題

本發明在于提供能夠有效地分析組織或血液中肝-羧酸酯酶1的肝-羧酸酯酶1的單克隆抗體、以及由所述抗體生成的雜交瘤細胞株。

進一步，本發明在于提供所述抗體的用途，即該抗體可用于分離并純化肝-羧酸酯酶1，從血液中檢測肝-羧酸酯酶1，而且能特異性地診斷肝癌。

技術方案

本發明的一方面提供與人肝羧酸酯酶1蛋白特異性結合的單克隆抗體，該單克隆抗體是由保藏號為KCLRF-BP-00282的雜交瘤所生成的。

本發明的另一方面提供保藏號為KCLRF-BP-00282的雜交瘤細胞，它能生成本發明的單克隆抗體。

進一步，本發明的另一方面提供用于分離并純化人肝羧酸酯酶1蛋白的、含有本發明的單克隆抗體的組合物。

進一步，本發明的另一方面提供用于檢測人肝羧酸酯酶1的、含有本發明的單克隆抗體的組合物。

進一步，本發明的另一方面提供用于檢測尿液或血液中人肝羧酸酯酶1濃度的方法，該方法包括通過將本發明的單克隆抗體與樣本進行接觸來檢測抗原-抗體復合物的形成。